藥物誘導(dǎo)性反轉(zhuǎn)雞、鵪鶉及其屬間雜交種胚胎性別相關(guān)基因表達規(guī)律的研究.pdf

1、禽類的胚胎發(fā)育過程十分復(fù)雜，導(dǎo)致胚胎死亡的因素是多方面的。雞與鵪鶉屬間雜交的早期胚胎發(fā)育過程有一個死亡高峰期，至出殼后鑒定個體全部為雄性且完全不育，這些現(xiàn)象用普通意義上的胚胎死亡原因無法解釋。本研究主要從形態(tài)學(xué)上觀察雞與鵪鶉屬間雜交種的形態(tài)發(fā)育差異，通過胚蛋注射的方法對雞、鵪鶉以及其屬間雜交種胚胎進行處理，觀察Formestane和17 β-estradiol 對其性別分化的影響，探討ER等基因在雞、鵪鶉以及其屬間雜交種胚胎藥物處理前后

2、基因表達規(guī)律與雞與鵪鶉屬間雜交種胚胎早期死亡的關(guān)系而展開本實驗。
　　 1 雞、鵪鶉以及其屬間雜交種胚胎發(fā)育的形態(tài)學(xué)觀察目前關(guān)于雞和鵪鶉胚胎發(fā)育形態(tài)的研究已有較詳細的報道，但對雜交禽胚胎發(fā)育形態(tài)的實驗研究未見報道。本實驗以雜交禽、鵪鶉和雞為實驗材料，從其入孵至出雛，取活體胚胎做解剖和拍照，通過解剖顯微鏡觀察其發(fā)育特征，進行比較分析，結(jié)果表明：雜交禽、鵪鶉以及雞的胚胎從整體上觀察，形態(tài)發(fā)育差異不大；時間上比較，雜交禽發(fā)育進程比雞的

3、快比鵪鶉慢，并且在9 天之前差異較大。
　　 2 Formestane和17 β-estradiol 誘導(dǎo)雞、鵪鶉胚胎性反轉(zhuǎn)的研究性激素對孵化早期的家禽胚胎性別有很大影響，給正常孵化的雞、鵪鶉種蛋注射17 β-雌二醇和芳香化酶抑制劑，可分別將其性別誘導(dǎo)為雌性和雄性。為了研究驗證Formestane和17 β-estradiol 對雞和鵪鶉胚胎性分化的影響，本試驗根據(jù)家禽性別分化的機理，利用100μg/ml的Formestane和

4、50μg/ml的17 β-estradiol，通過胚蛋注射的方法對3日齡的雞胚和2日齡的鵪鶉胚進行處理，觀察Formestane和17 β-estradiol 對鵪鶉性別分化的影響。結(jié)果表明，注射Formestane和17 β-estradiol的雞胚和鵪鶉胚都發(fā)生了性反轉(zhuǎn)。同時對雜交禽也采取和鵪鶉同樣的方法進行處理，但結(jié)果顯示死亡率很高，出殼率基本為零。據(jù)此推測，注射藥物引起基因表達紊亂很可能也是雜交種全部死亡的原因之一。
　　

5、 3 ER、3 β-HSD、P450c17和P450arom基因的表達量分析鳥類胚胎的性分化在早期受性激素影響，特別是雌激素在性分化中起著非常重要的作用。而體內(nèi)雌激素一般是由膽固醇轉(zhuǎn)化產(chǎn)生，這一轉(zhuǎn)化過程需要羥基類固醇脫氫酶（在家禽中主要有3 β-HSD及P-450c17等類固醇類基因）和P450arom基因的作用。本實驗采集72、96、120、144、168、192h的雞、鵪鶉和雜交種胚胎各10 枚，在胚胎性別鑒定的基礎(chǔ)上，運用實時熒

6、光定量PCR 方法檢測ER、3 β-HSD、P450c17和P450arom 四個基因的表達量，發(fā)現(xiàn)作為ER的調(diào)控基因，3 β-HSD、P450arom和P-450c17基因的表達在雜交種中都表現(xiàn)出提前表達的趨勢，而ER 既提前表達，而且其表達的量也表現(xiàn)出與其親本有較大差異，同時其表達的時間與其胚胎死亡的時間基本吻合，因此可以猜測ER很可能在雜交種胚胎早期死亡中起著較為關(guān)鍵的作用。
　　 4 凋亡因子bcl-2和p53基因的表達

7、量分析雞和鵪鶉胚胎發(fā)育早期各個時間段bcl-2、P53基因表達模式的研究尚未見報道，本試驗采集72、96、120、144、168、192h的雞、鵪鶉和雜交種胚胎各10 枚，在胚胎性別鑒定的基礎(chǔ)上，運用實時熒光定量PCR 方法檢測bcl-2和p53基因的表達量，發(fā)現(xiàn)雌性胚胎bcl-2表達高峰點與其P53表達最低水平相吻合；與雞和鵪鶉胚胎比較，雜交胚胎在72、120 h bcl-2、P53基因表達出現(xiàn)異常，因此可以猜測bcl-2、P53基因

8、異常表達很可能也是引起雜交種胚胎早期死亡的原因之一。5性誘導(dǎo)后ER等基因的表達量分析性激素在鳥類早期胚胎的性分化過程中有很大的影響，本試驗采用熒光定量PCR 方法研究外源激素處理的雞和鵪鶉胚胎不同時期的ER、3 β-HSD、P450c17、P450arom、bcl-2和p53基因表達，發(fā)現(xiàn)和正常情況下比較，ER等基因表達出現(xiàn)紊亂，這種情況與外源激素處理的雞和鵪鶉胚胎死亡率高基本吻合，可以猜測這也可能是引起藥物注射后雜交胚胎死亡率高，出殼