牦牛種間雜交早期胚胎體外發(fā)育的研究.pdf

1、本研究對(duì)影響牦牛種間雜交早期胚胎體外生產(chǎn)的幾個(gè)重要因素進(jìn)行了探索，初步建立了牦牛種間雜交早期胚胎體外發(fā)育體系，為探索異種配子受精的發(fā)育過(guò)程及犏牛受胎率低、流產(chǎn)率高的原因，提供有力的實(shí)驗(yàn)手段，為牦牛雜交改良提供科學(xué)依據(jù)，對(duì)西部牧業(yè)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。研究結(jié)果如下： 1.抽吸法和抽吸加切割法采集牦牛和當(dāng)?shù)攸S牛卵母細(xì)胞，抽吸法平均從每個(gè)卵巢采集的可用卵母細(xì)胞數(shù)(4.45VS4.67)極顯著低于抽吸加切割法采集的可用卵母細(xì)胞數(shù)

2、(6.33VS7.28)。2.牦牛卵巢表面卵泡卵母細(xì)胞在成熟液A(M199+10％FBS+75mg/L青霉素+50mg/L鏈霉素)中的成熟率(75.56％)高于在成熟液B(在A的基礎(chǔ)上添加1.0mg/LFSH)的成熟率(72.73％)，低于在成熟液C(在A的基礎(chǔ)上添加0.5mg/LFSH)培養(yǎng)的成熟率(78.57％)，但三者無(wú)顯著差異(P＞0.05)，這表明適量的FSH可促進(jìn)牦牛卵母細(xì)胞的體外成熟，F(xiàn)SH的劑量超過(guò)一定濃度時(shí)對(duì)牦牛卵母細(xì)

3、胞的體外成熟有不利影響。在成熟液D(在C的基礎(chǔ)上添加5.0mg/LLH和1.0mg/L17β-E2)和成熟液E(在D的基礎(chǔ)上添加55mg/L丙酮酸鈉)中的成熟率(81.43％VS82.76％)高于前三者，且E液的成熟率高于D液的成熟率，表明55mg/L丙酮酸鈉促進(jìn)牦牛卵母細(xì)胞成熟。E液為本實(shí)驗(yàn)室條件下牦牛卵母細(xì)胞體外成熟的最佳培養(yǎng)液。 3.牦牛卵巢表面卵泡卵母細(xì)胞的成熟率(81.29％VS67.74％)極顯著高于牦牛卵巢內(nèi)卵泡卵

4、母細(xì)胞的成熟率(P＜0.01)。 4.以BO液為受精基礎(chǔ)液，荷斯坦奶牛凍精體外受精牦牛卵母細(xì)胞，精子濃度為0.4×106～0.6×106/ml時(shí)的卵裂率(28.49％VS49.15％、50.34％)極顯著地低于精子濃度為4×106～6×106/ml和40×106～60×106/ml時(shí)的卵裂率(P＜0.01)，后兩者無(wú)顯著差異(P＞0.05)；精子濃度為0.4×106～0.6×106/ml和4×106～6×106/ml時(shí)，種間雜交

5、胚胎的桑囊胚率(3.95％、3.53％VS1.38％)顯著高于精子濃度為40×106～60×106/ml時(shí)的桑囊胚率(P＜0.05)。精卵共培養(yǎng)6h的卵裂率(35.97％VS49.15％、49.32％)顯著的低于精卵共培養(yǎng)24h和48h的卵裂率(P＜0.05)；精卵共培養(yǎng)24h的桑囊胚率(3.53％VS2.00％、2.82％)高于精卵共培養(yǎng)6h和48h的桑囊胚率，但差異不顯著(P＞0.05)。因此，荷斯坦奶牛凍精體外受精牦牛卵母細(xì)胞，精

6、子適宜濃度為4×106～6×106/ml，受精適宜時(shí)間為24h。 5.野牦牛凍精與牦牛卵母細(xì)胞受精的早期胚胎與輸卵管上皮細(xì)胞共培養(yǎng)的桑囊胚率(10.40％VS7.71％)高于與顆粒細(xì)胞單層共培養(yǎng)的桑囊胚率，但兩者無(wú)顯著差異(P＞0.05)；這兩者的桑囊胚率極顯著高于在SOF和CRlaa液中的桑囊胚率(0、0)(P＜0.01)。因此，與輸卵管上皮細(xì)胞共培養(yǎng)，是克服牦牛胚胎8～16細(xì)胞期發(fā)育阻斷的有效方法。 6.建立的牦牛種