bcl-2基因CpG島甲基化對雞與鵪鶉屬間雜交種早期胚胎發(fā)育的影響.pdf

1、【目的】雞與鵪鶉屬間雜交面臨著受精率低和孵化率低等遠緣雜交不親和性，特別是雜交種早期胚胎大量死亡，嚴重影響雞與鵪鶉屬間雜交的推廣應用。本研究在對雞、鵪鶉及其雜交種胚胎樣本進行性別鑒定的基礎上，采用與細胞凋亡和增殖相關的bcl-2基因的啟動子區(qū)CpG島甲基化檢測和熒光定量PCR驗證的方法，對比分析bcl-2基因的甲基化程度和基因表達水平，以探討bcl-2基因甲基化對雞與鵪鶉屬間雜交種早期胚胎死亡的影響作用。
　　【方法】
　　

2、（1）用CHD基因分析雞、鵪鶉及其雜交種性別比率采集雞、鵪鶉及其雜交種胚胎胚齡為60h、66h、72h、84h、96h、108h、120h、132h、144h、156h、168h（7d）共11個時間點的胚胎組織樣并提取基因組DNA，孵化雜交種蛋2465枚，采集胚胎樣550枚（每個時間點采集50枚，共11個時間點）,通過PCR的方法選擇與性別分化相關的CHD基因進行性別鑒定。
　?。?）用MSP方法對雞、鵪鶉及其雜交種胚胎組織中bc

3、l-2基因進行甲基化程度檢測。采用甲基化特異性PCR(MSP)方法對雞、鵪鶉及其屬間雜交種早期胚胎發(fā)育至60h、66h、72h、84h、96h、108h、120h、132h、144h、156h、168h11個不同胚齡胚胎組織bcl-2基因啟動子區(qū)CpG島甲基化狀態(tài)進行檢測與對比分析，用甲基化引物擴增出182bp的目的片段即判定為甲基化狀態(tài)，而用非甲基化引物能擴增出片段長為181bp的目的條帶就說明該bcl-2基因發(fā)生了非甲基化。

4、　　【結果】
　?。?）雜交種蛋孵化至60h時其受精率僅能達到13.7％；當母本朝鮮鵪鶉達到其產蛋高峰期時，受精率則有所提高，孵化至156h可達35.7%，總體的平均受精率為22.3%。
　?。?）雞和鵪鶉胚胎的各時間點雌雄比均趨近于1:1，雞胚和鵪鶉胚的總體雌性百分率為49.697%和52.424%，與之相對應的二者的總體雄性百分率為50.303%和47.576%，雌雄比平均值比分別約為1和1.04；而雜交種胚胎性別的鑒定

5、結果則與雞、鵪鶉明顯不同，在胚胎發(fā)育至72h-168h時平均雄性百分率為72.5%，顯然遠高于雌性百分率27.5%，所有時間點上的總體雌雄比率為1:4，雌性胚胎枚數(shù)有明顯差異。
　?。?）正常發(fā)育的雞胚和鵪鶉胚齡在60h、66h、72h、120h大部分樣本均呈高甲基化狀態(tài)，鵪鶉胚胎在96h和108h鵪鶉胚為非甲基化狀態(tài)，雞胚在96h和108h仍然為甲基化狀態(tài)；而雞與鵪鶉屬間雜交種胚胎在60h、66h、72h、96h、108h和12