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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:以古爾班通古特沙漠為研究區(qū),培養(yǎng)分離沙漠微藻,通過(guò)形態(tài)學(xué)特征和分子生物學(xué)手段對(duì)分離藻種進(jìn)行物種鑒定,然后對(duì)其總脂含量及其油脂制備生物柴油的脂肪酸甲酯組分進(jìn)行分析測(cè)定,篩選含油量高,適合作為制備生物柴油原料的藻種。
方法:通過(guò)液體BBM培養(yǎng)基將采集沙樣進(jìn)行混合培養(yǎng),運(yùn)用96孔板有限稀釋法分離藻種,設(shè)計(jì)綠藻門的18SrDNA兼并引物及5.8SrDNA-ITS特異性引物,分別對(duì)分離的單藻種進(jìn)行分子鑒定。將單藻種進(jìn)行大量培養(yǎng)后獲
2、得的藻液經(jīng)冷凍干燥成藻粉,通過(guò)分光光度法測(cè)定其粗脂含量,氣相色譜分析其油脂制備生物柴油的脂肪酸甲酯組分,進(jìn)行比較篩選出含油量較高,且生物量較大的藻種。
結(jié)果:
1.培養(yǎng)分離出7種沙漠微藻,對(duì)其基因組18SrDNA進(jìn)行序列擴(kuò)增及分析,結(jié)果顯示有2種隸屬于小球藻屬,1種隸屬于膠球藻屬,1種隸屬于鏈帶藻屬,1種隸屬于Chlorosarcinopsis屬,1種隸屬于片球藻屬,還有1種未明確到屬,可能為新的物種。
2
3、.對(duì)分離藻種中的2種進(jìn)行了5.8SrDNA-ITS序列擴(kuò)增及分析,其中GTD8A1與Chlorella sp.MBIC10595可能為同一物種,GTD9C2可能為Desmodes musmultivariabilis種內(nèi)的一個(gè)變種。
3.微藻樣品中的粗脂含量最高為片球藻屬,含量達(dá)26.4%(占細(xì)胞干重),最低為小球藻屬,含量為7.8%(占細(xì)胞干重),2種小球藻的粗脂含量都偏低,片球藻屬在生物量和粗脂含量上都有明顯優(yōu)勢(shì),是制備生
4、物柴油比較優(yōu)良的藻種來(lái)源。
4.微藻油脂制備生物柴油的主要脂肪酸甲酯組分為C16:0、C17:0和C18不飽和脂肪酸甲酯,C12:0、C14:0、C18:0和C20:0含量都比較少,C18:3含量最高,其中有4株微藻樣品的C18:3含量均超過(guò)40%(占脂肪酸甲酯總含量)。
結(jié)論:
1.運(yùn)用96孔板有限稀釋法培養(yǎng)分離出7種沙漠微藻,通過(guò)18SrDNA序列分析將其初步鑒定到屬,分別來(lái)自膠球藻屬、小球藻屬、鏈帶藻
5、屬、Chlorosarcinopsis屬、片球藻屬,并通過(guò)5.8SrDNA-ITS序列分析將分離藻種中的2個(gè)物種鑒定到種。
2.篩選出一株生物量及粗脂含量都比較高的沙漠微藻,其生物量為0.276g/L,粗脂含量占細(xì)胞干重的26.4%,是制備生物柴油比較優(yōu)良的藻種來(lái)源。
3.微藻油脂制備生物柴油的脂肪酸甲酯組分含有豐富的C16—C18系脂肪酸甲酯,C16:0的普遍存在且有較高的含量對(duì)于制備的生物柴油十六烷值的提高有很大
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