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1、單位代碼:學(xué)號(hào):100862009076和BvGLPl轉(zhuǎn)抗病性鑒定MolecularDetectionandIdentificationofGmPGIP3andBvGLPlTransgenicWheatwithEnhanceddiseaseresistance學(xué)位申請(qǐng)人:指導(dǎo)教師:學(xué)科專業(yè):學(xué)位類別:授予單位:答辯日期:黨良邵艷軍副教授張?jiān)銎G研究員發(fā)育生物學(xué)理學(xué)碩士河北農(nóng)業(yè)大學(xué)二。一二年五月二十九日摘要GmPGIP3是大豆多聚半乳糖醛酸
2、酶抑制蛋白3,能夠抑制一些真菌內(nèi)切多聚半乳糖醛酸活性,從而減弱真菌對(duì)植株的侵害。BvGLPl是甜菜中的一類萌發(fā)素蛋白,萌發(fā)素催化草酸氧化產(chǎn)生過(guò)氧化氫,過(guò)氧化氫能夠誘導(dǎo)與抗性有關(guān)的基因表達(dá),從而使植物產(chǎn)生相關(guān)抗性。本研究利用基因工程技術(shù)構(gòu)建了GmPGIP3和BvGLPl基因的單子葉植物表達(dá)載體pA25GmPGIP3和pA20BvGLPl,通過(guò)基因槍介導(dǎo)法將其轉(zhuǎn)入推廣的小麥品種揚(yáng)麥18和揚(yáng)麥19中,成功的獲得了轉(zhuǎn)基因小麥植株。經(jīng)過(guò)多代的鑒定
3、和選育,最終挑選出了抗小麥紋枯病、赤霉病和根腐病的小麥新種質(zhì),主要研究工作如下:1抗小麥紋枯病揚(yáng)麥19種質(zhì)的獲得。對(duì)轉(zhuǎn)GmPGIP3基因揚(yáng)麥19的To至T4代植株,進(jìn)行PCR、Southernblot、半定量RTPCR、熒光定量QRTPCR分析,人工接種致病菌禾谷絲核菌后進(jìn)行抗性鑒定。分子檢測(cè)結(jié)果表明,GmPGIP3已轉(zhuǎn)入揚(yáng)麥19,已驗(yàn)證在部分轉(zhuǎn)基因小麥不同株系中以一至二個(gè)拷貝存在,并在轉(zhuǎn)錄水平上表達(dá);不同轉(zhuǎn)基因株系的抗病性對(duì)比受體材料
4、有明顯提高而且可以穩(wěn)定遺傳。同時(shí)調(diào)查主要農(nóng)藝性狀與受體材料沒(méi)有明顯差異,說(shuō)明外源基因?qū)π←溦IL(zhǎng)基本沒(méi)有影響。2抗小麥赤霉病揚(yáng)麥19種質(zhì)的獲得。對(duì)轉(zhuǎn)GmPGIP3基因揚(yáng)麥19的To至T4代植株,進(jìn)行上述分子檢測(cè),在江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所網(wǎng)室內(nèi),采用人工接種致病菌禾谷鐮刀菌后進(jìn)行抗性鑒定。分子檢測(cè)結(jié)果表明,GmPGIP3已轉(zhuǎn)入揚(yáng)麥19,已驗(yàn)證在部分轉(zhuǎn)基因小麥不同株系中以一至二個(gè)拷貝存在,并在轉(zhuǎn)錄水平上表達(dá);不同轉(zhuǎn)基因株系的抗病性
5、對(duì)比受體材料有明顯提高而且可以穩(wěn)定遺傳。3抗小麥根腐病揚(yáng)麥18種質(zhì)的獲得。對(duì)轉(zhuǎn)GmPGIP3和BvGLP—J7基因揚(yáng)麥18的To至T2代植株進(jìn)行上述分子檢測(cè),人工接種混合致病菌后進(jìn)行抗性鑒定。分子檢測(cè)結(jié)果表明,GmPGIP3和BvGLP1已分別轉(zhuǎn)入不同株系的揚(yáng)麥18。已驗(yàn)證在部分轉(zhuǎn)基因小麥不同株系中以一至二個(gè)拷貝存在,并在轉(zhuǎn)錄水平上表達(dá);不同轉(zhuǎn)基因株系的抗病性對(duì)比受體材料有明顯提高而且可以穩(wěn)定遺傳。同時(shí)調(diào)查主要農(nóng)藝性狀與受體材料沒(méi)有明顯
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