牛乳中硫氰酸鈉含量檢測——高效液相色譜法與毛細管電泳法的建立.pdf

1、硫氰酸鹽存在于各類天然食品（包括乳制品）中，并可在人類肝臟中合成，是氰化物解毒的代謝產(chǎn)物。硫氰酸鹽適量添加于牛乳中，可以起到抑菌，保鮮，延長保質(zhì)期的作用。但其毒理研究結(jié)果顯示，過量攝入硫氰酸鹽，可引發(fā)急性中毒反應，超過限量攝取也可妨礙機體對碘的利用，引起甲狀腺疾病，尤其對胎兒和嬰兒的智力和神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育存在較大的副作用。
　　 目前，國內(nèi)外對牛奶中的硫氰酸鹽的檢測主要利用分光光度計、離子色譜-電導檢測器、離子色譜-二極管陣列檢測器

2、、離子色譜-質(zhì)譜檢測器等儀器進行檢測。但是，國內(nèi)尚未制定檢測牛奶中硫氰酸鈉含量的標準方法，因此也未制定出相關(guān)的生鮮乳中硫氰酸鈉的限值，并難以進行乳中硫氰酸鹽對人類健康潛在危害的風險評估。本文旨在建立高效液相色譜法檢測乳中的硫氰酸鹽含量，以求能夠快速、準確、簡便地測定乳品中的硫氰酸鹽含量，一方面豐富檢測的手段，另一方面為制定生鮮乳中硫氰酸鈉的衛(wèi)生標準提供依據(jù)。
　　 本實驗分別采用高效液相色譜法和毛細管電泳法對原奶和市售巴氏成品乳

3、中硫氰酸鈉含量的檢測方法進行了研究。
　　 根據(jù)反相離子對色譜法的原理，建立了檢測牛奶中硫氰酸鈉質(zhì)量濃度的高效液相色譜方法。前處理使用乙腈沉淀蛋白，堿性氧化鋁SPE柱除去部分水溶性維生素、氨基酸，離心脫脂得到樣品。以磷酸三乙胺(pH=7.0)∶甲醇=95∶5作為流動相，用Agela-ASBr(R)C18反相色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)，柱溫30℃±2℃，流速0.8mL/min，以二極管陣列紫外檢測器分析樣品。該分析方

4、法質(zhì)量濃度范圍在5～500mg/L內(nèi)線性較好，r＞0.9995。該方法可適用于生鮮乳和巴氏滅菌成品乳，檢測限可達到0.1 mg/kg，定量范圍0.5～50 mg/kg，精確度＜10％，回收率＞90％。
　　 利用毛細管區(qū)帶電泳法直接檢測牛奶中硫氰酸鈉質(zhì)量濃度。前處理與高效液相色譜法相同。在NaH2PO4-Na2B4O7緩沖液中加入溴化十四烷基三甲基溴化銨(TTAB)作為電滲流反相作用劑，分離電壓-20 kV，分離溫度30℃，電極

5、反向，以二極管陣列紫外檢測器218 nm波長下分析樣品，質(zhì)量濃度范圍在5～500 mg/L內(nèi)線性較好，r＞0.9995。該方法可適用于生鮮乳和巴氏滅菌成品乳，檢測限可達到0.05mg/kg，定量范圍0.5～50 mg/kg，精確度＜10％，回收率＞90％。
　　 對高效液相色譜法和毛細管電泳法檢測牛奶中的硫氰酸鈉含量進行比較，毛細管電泳法的最低檢測限為0.05mg/kg，低于高效液相色譜法的最低檢測限0.1mg/kg，因此毛細管

6、電泳法在檢測靈敏度方面也比高效液相色譜高;高效液相色譜法在97.6～98.3％之間，毛細管電泳回收率在97.8～99.6％之間，但是高效液相色譜法的重復回收率測定標準偏差均值為0.5％低于毛細管電泳法的標準偏差均值1.2％，因此高效液相色譜法具有更高的穩(wěn)定性;毛細管電泳法的理論塔板數(shù)9685高于液相色譜法的理論塔板數(shù)7623，因此其分離效果更好;毛細管電泳法的單個樣品分析時間為6分鐘，高效液相色譜法為15分鐘，因此毛細管色譜法的分析時間

7、更短。綜上所述，兩種方法所得含量檢測結(jié)果和添加回收實驗結(jié)果一致，檢測含量范圍也一致，兩種方法都具有較高的準確性、精密性和穩(wěn)定性。
　　 同時，也將兩種新方法和文獻報道中原有的紫外分光光度法和離子色譜法進行了比較，毛細管電泳的檢測靈敏度最高為0.05mg/kg，低于離子色譜法的最低檢測限0.08mg/kg，也低于高效液相色譜法的最低檢測限0.10mg/kg和紫外分光光度法的最低檢測限2mg/kg;離子色譜法回收率在98.0～106

8、.4％之間，高效液相色譜法在97.6～98.3％之間，毛細管電泳回收率在97.8～99.6％之間，紫外分光光度法在82.57～87.71％，離子色譜法的回收率較高，但是高效液相色譜法的回收率測定結(jié)果離散程度最小，因此高效液相色譜法具有更高的準確性;高效液相色譜法的穩(wěn)定性最好，日內(nèi)相對標準偏差為0.65％，低于毛細管電泳法的1.45％，也低于離子色譜法的0.80％和紫外分光光度法的2.0％。綜上所述，本文建立的兩種新方法在準確性、精密性和