2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、茶氨酸(又稱 N-乙基-γ-L-谷氨酰胺,簡稱 Theanine)是茶中特有的氨基酸,不僅影響著茶的滋味,而且還具有重要的生物活性,如降血壓、抗癌、增強抗腫瘤藥物的療效、保護神經(jīng)、鎮(zhèn)靜安神、提高學(xué)習(xí)和記憶能力和抗疲勞的功效。本試驗克隆了茶氨酸合成相關(guān)的酶基因,同時建立了“新高”梨的增殖體系,為人工培育茶氨酸梨提供研究基礎(chǔ)。
   1、本試驗利用cDNA末端快速擴增技術(shù)擴增茶氨酸合成相關(guān)酶基因的3’端,設(shè)定了如下擴增體系:模板cD

2、NA100ng,1 0×Buffer(Mg 2+p lus)5μl,2.5mmol/L dNTPs 8μl,10μmol/L 特異性引物GSP47-1(第二輪為GSP47-2)
   1μl、10μmol/L 接頭引物UPM(第二輪為NUP)1 μl,L Ataq DNA聚合酶2.5U,總體積50μl。擴增程序為:9 4℃ 3min;94℃ 30s;70℃ 45s;72℃ 80s,14個循環(huán),-0.5℃/cycle;94℃ 30

3、s;63℃ 45s;72℃80s,25個循環(huán);72℃延伸10 min。在此基礎(chǔ)上克隆出長度約為2.4kb的序列。將該序列與GenBank 上已知序列比對,發(fā)現(xiàn)與葡萄的谷氨酸氨連接酶的核苷酸序列的相似度達81%。
   2、反向PCR技術(shù)(IPCR)是對已知序列DNA的兩側(cè)未知序列進行擴增和研究的方法。本試驗應(yīng)用IPCR方法克隆茶氨酸合成相關(guān)酶基因的啟動子序列:即20μl反應(yīng)液中包含1μg模板、5U 限制性內(nèi)切酶Bsp1407,2

4、μl 10×T buffer,2μl 0.1%BSA;
   酶切產(chǎn)物環(huán)化自連體系:50μl 體系中0.5μg 單酶切基因組DNA,5μl 10×T4 連接緩沖液、5U T4DNA連接酶,22℃連接過夜;IPCR反應(yīng)體系:50μl 體系中約50 ng 環(huán)化自連接產(chǎn)物、2.5μl 10×PCRBuffer、25mmol/L Mg 2+5μl、10mmol/L dNTPs 1μl,10μmol/L 引物對(第一輪1S1-1S2,第二

5、輪2S1-2S2)各2ul、1U Taq 聚合酶。IPCR擴增程式為:94℃ 3min,94℃ 1 min,56℃ 1 min,72℃ 1min,循環(huán)29 次;72℃延伸7min。利用建立的IPCR技術(shù)克隆出茶氨酸合成酶基因5’上游長度為171bp的啟動子序列,且該序列含有TATA-box,該元件對基因轉(zhuǎn)錄的正確起始起著重要的作用。
   3、本試驗以‘新高’梨芽為外植體,研究了不同濃度植物生長調(diào)節(jié)劑對其離體增殖的影響。結(jié)果表明

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