t-cadherin基因失活與原發(fā)性肝癌惡性生物學(xué)特征的關(guān)系及其臨床意義

1、<p>　申請(qǐng)代碼：</p><p>　受理部門：</p><p>　收件日期：</p><p>　受理編號(hào)：</p><p><b>　　國(guó)家自然科學(xué)基金</b></p><p><b>　　申 請(qǐng) 書</b></p><p><b&

2、gt;　　資助類別： </b></p><p><b>　　亞類說(shuō)明： </b></p><p><b>　　附注說(shuō)明： </b></p><p><b>　　項(xiàng)目名稱： </b></p><p>　　申 請(qǐng) 者： 電話： <

3、;/p><p><b>　　依托單位： </b></p><p><b>　　通訊地址： </b></p><p>　　郵政編碼： 單位電話： </p><p><b>　　電子郵件： </b></p><p>　　申報(bào)日期：

4、 2004年3月9日</p><p>　　國(guó)家自然科學(xué)基金委員會(huì)</p><p>　　基本信息yEKHuo0AOsK</p><p>　　項(xiàng)目組主要成員(杰出青年科學(xué)基金不填此欄)</p><p>　　說(shuō)明: 1. 高級(jí)、中級(jí)、初級(jí)、博士后、博士生、碩士生人員數(shù)由申請(qǐng)者負(fù)責(zé)填報(bào)，總?cè)藬?shù)自動(dòng)生成。</p>&l

5、t;p>　　說(shuō)明: 2. 項(xiàng)目組主要成員不包括項(xiàng)目申請(qǐng)者。</p><p>　　經(jīng)費(fèi)申請(qǐng)表 （金額單位：萬(wàn)元）</p><p><b>　　報(bào)告正文</b></p><p>　　（一）立項(xiàng)依據(jù)與研究?jī)?nèi)容</p><p>

6、<b>　　1、項(xiàng)目的立項(xiàng)依據(jù)</b></p><p>　　原發(fā)性肝癌是高度惡性的腫瘤，盡管采取積極手術(shù)治療，但絕大多數(shù)病人仍難免死于腫瘤復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移，其死亡率高居我國(guó)腫瘤死亡率的第二位。研究已表明肝癌的發(fā)生乙肝、丙肝感染及攝入黃曲霉素污染的食物有密切關(guān)系, 其發(fā)生發(fā)展與多種癌基因過(guò)度表達(dá)，以及腫瘤抑制基因失活密切相關(guān)。但目前對(duì)其發(fā)生發(fā)展的精確分子機(jī)制尚不完全清楚。因此, 進(jìn)一步探索研究新的基

7、因功能改變與肝癌發(fā)生發(fā)展及其惡性特征的關(guān)系，對(duì)揭示其發(fā)生發(fā)展的精確分子機(jī)制、設(shè)計(jì)合理的治療藥物及判斷預(yù)后， 進(jìn)一步提高我國(guó)肝癌的治療水平具有重要意義。</p><p>　　T-cadherin分子屬細(xì)胞粘附分子cadherin超家族。 Cadherin超家族分子為細(xì)胞表面糖蛋白，其功能主要包括調(diào)節(jié)鈣介導(dǎo)的細(xì)胞粘附、細(xì)胞極性及形態(tài)形成，以及參與細(xì)胞間的識(shí)別和信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制(1,2,3,4)。經(jīng)典的Cadherin分子

8、如E-cadherin和N-cadherin由細(xì)胞外鈣結(jié)合區(qū)及跨膜區(qū)兩部分組成，而T-cadherin因缺失經(jīng)典Cadherin分子所具有的跨膜區(qū)而經(jīng)糖基磷脂酰肌醇分子附著于細(xì)胞膜上（5）,故而命名truncated-cadherin（即T-cadherin，又稱CDH13或H-cadherin）。近年來(lái)對(duì)經(jīng)典的Cadherin分子的深入研究發(fā)現(xiàn)，E-，N-cadherin分子缺失或突變與多種腫瘤如肝癌、胃癌、乳腺癌、肺癌的發(fā)生及轉(zhuǎn)移特

9、征密切相關(guān)（6，7，8,9,10）。將E-cadherin分子重新導(dǎo)入缺失E-cadherin分子表達(dá)的腫瘤細(xì)胞，則腫瘤細(xì)胞的增殖及侵犯能力顯著受抑（11）。近年已開(kāi)始有T-cadherin分子在肝癌、乳腺癌、肺癌、結(jié)直腸癌、卵巢癌及皮膚鱗癌中表達(dá)顯著下降、缺失的報(bào)導(dǎo)（12，13，14，15,16,17,18），推</p><p>　　腫瘤抑制基因啟動(dòng)子甲基化導(dǎo)致基因失活在腫瘤的發(fā)病機(jī)制中起著重要作用（20，21

10、，22，23）。T-cadherin基因在乳腺癌、結(jié)直腸癌及肺癌中并未發(fā)生缺失突變，但由于其啟動(dòng)子異常甲基化導(dǎo)致T-cadherin基因失活，進(jìn)而導(dǎo)致其蛋白表達(dá)水平顯著下降或缺失（13,16,24）。T-cadherin基因位于染色體16q24，肝癌的發(fā)生與染色體16q24的缺失、突變密切相關(guān)(25)。 Riou （2002）對(duì)位于染色體16q24的13個(gè)常常在肝癌中缺失表達(dá)的基因的轉(zhuǎn)錄研究發(fā)現(xiàn)，T-cadherin mRNA在HepG

11、2, PLC/PRF/C, TONG 和HA22TNGH四種肝癌細(xì)胞株中缺失表達(dá)，但T-cadherin基因本身并未發(fā)生缺失突變（12）。Yu（2002）進(jìn)一步研究顯示T-cadherin基因啟動(dòng)子在肝癌中高度甲基化，而E-cadherin基因啟動(dòng)子在肝癌中不發(fā)生甲基化，表明在Cadherin細(xì)胞粘附分子超家族中T-cadherin基因啟動(dòng)子甲基化在肝癌中具有高度特異性,且T-cadherin基因啟動(dòng)子甲基化與T-cadherin基因失

12、活密切相關(guān)（26）。這些研究表明T-cad</p><p>　　本研究將進(jìn)一步研究T-cadherin在肝癌中的基因功能，調(diào)查缺失表達(dá)T-cadherin的肝癌細(xì)胞株重新表達(dá)T-cadherin是否能抑制肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)特征，并在裸鼠肝癌模型上加以證實(shí)。同時(shí)，進(jìn)一步研究其基因功能的分子機(jī)制。在臨床切除的肝癌標(biāo)本中研究T-cadherin基因失活與肝癌惡性分化程度、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)等惡性生物學(xué)特征的

13、關(guān)系，進(jìn)一步揭示T-cadherin基因失活與臨床肝癌預(yù)后的關(guān)系。在肝癌細(xì)胞株及裸鼠肝癌模型上證實(shí)是否去甲基化藥物能重新誘導(dǎo)T-cadherin分子表達(dá)，并抑制肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)特征，觀察其潛在的治療作用和可能的毒副作用。由于國(guó)內(nèi)外尚無(wú)類似研究報(bào)道，申請(qǐng)人具有研究T-cadherin基因與C6細(xì)胞惡性生物學(xué)特征的關(guān)系及其分子機(jī)制的豐富經(jīng)驗(yàn)，預(yù)期該研究成果能達(dá)國(guó)際先進(jìn)水平。</p><p>&l

14、t;b>　　主要參考文獻(xiàn)：</b></p><p>　　1. Angst BD, Marcozzi C and Magee AI. The cadherin superfamily: diversity in form and function. J Cell Sci., 2001, 114:629-641</p><p>　　2. Kemler R. Classic

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36、 M, Xu J, et al. Methylation profiling of twenty promoter-CpG islands of genes which may contribute to hepatocellular carcinogenesis. BMC Cancer 2002, 2:29</p><p>　　2、項(xiàng)目的 研究?jī)?nèi)容、研究目標(biāo)，以及擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題</p><

37、p>　　一、研究T-cadherin在肝癌中的基因功能</p><p>　　1.將T-cadherin基因?qū)肴笔П磉_(dá)T-cadherin的肝癌細(xì)胞株HepG2，使其表達(dá)T-cadherin分子，研究表達(dá)T-cadherin分子的肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)特征的變化，證實(shí)是否T-cadherin重新表達(dá)能抑制肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)特征。</p><p>　

38、　2.將缺失表達(dá)T-cadherin的HepG2細(xì)胞和轉(zhuǎn)染后表達(dá)T-cadherin 的HepG2細(xì)胞于皮下接種裸鼠，在裸鼠肝癌模型上進(jìn)一步證實(shí)T-cadherin基因的腫瘤抑制基因功能。</p><p>　　3．研究T-cadherin基因在肝癌中腫瘤抑制功能的分子機(jī)制。證實(shí)是否T-cadherin在肝癌細(xì)胞株存在與在C6細(xì)胞中一致的分子機(jī)制，即T-cadherin分子通過(guò)誘導(dǎo)P21 CIP1/WAF1表達(dá)致使

39、肝癌細(xì)胞于細(xì)胞周期G2期阻滯。</p><p>　　二、 在臨床切除的肝癌標(biāo)本中研究T-cadherin基因失活與肝癌惡性分化程度、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)等惡性生物學(xué)特征的關(guān)系，在人肝癌中揭示T-cadherin基因失活與肝癌的惡性生物學(xué)特征及預(yù)后的關(guān)系。</p><p>　　1.研究50例臨床手術(shù)切除的肝癌標(biāo)本及癌周肝組織中T-cadherin的表達(dá)，揭示T-cadherin基因表達(dá)水平（失活）與肝

40、癌惡性分化程度、肝內(nèi)轉(zhuǎn)移（包括合并門靜脈癌栓和衛(wèi)星灶形成）的關(guān)系。</p><p>　　2.結(jié)合臨床病案記錄，選擇在臨床分期、病理類型及治療方法上具有可比性的肝癌病例，分別選取肝癌切除術(shù)后半年內(nèi)復(fù)發(fā)或肝外轉(zhuǎn)移以及2年 內(nèi)未復(fù)發(fā)或肝外轉(zhuǎn)移的肝癌病例的石蠟標(biāo)本各20例，研究T-cadherin基因的表達(dá)，揭示T-cadherin基因表達(dá)水平（失活）與肝癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的關(guān)系。</p><p>　　

41、三、在肝癌細(xì)胞株和裸鼠肝癌種植模型上證實(shí)去甲基化藥物5-aza-2’-deoxycytidine是否能重新誘導(dǎo)T-cadherin表達(dá)，并抑制肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)特征，觀察其對(duì)肝癌的治療價(jià)值和可能的毒副作用。</p><p>　　3、擬采取的研究方案及可行性分析</p><p>　　一、研究T-cadherin（T-cad）在肝癌中的基因功能的技術(shù)路線</p>

42、<p>　　1.構(gòu)建T-cad表達(dá)載體pcDNA3.T-cad</p><p><b>　　↓</b></p><p>　　以脂質(zhì)體lipofectin為載體轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞系HepG2細(xì)胞</p><p><b>　　↓</b></p><p>　　以G418篩選表達(dá)T-cad分子的陽(yáng)性

43、克隆</p><p><b>　　↓</b></p><p>　　Western blot鑒定轉(zhuǎn)染后T-cad蛋白表達(dá)</p><p><b>　　↓</b></p><p>　　比較表達(dá)T-cad的陽(yáng)性克隆與不表達(dá)T-cad的肝癌細(xì)胞的生物學(xué)特征:</p><p>　　細(xì)胞

44、增殖計(jì)數(shù) </p><p>　　3H標(biāo)胸腺嘧啶攝取率測(cè)定</p><p><b>　　克隆增殖試驗(yàn)</b></p><p><b>　　細(xì)胞粘附試驗(yàn)</b></p><p><b>　　細(xì)胞聚集試驗(yàn)</b></p><p>　　2.在裸鼠肝癌模型上

45、觀察T-cad陽(yáng)性克隆與不表達(dá)T-cad的肝癌細(xì)胞的生物學(xué)特征</p><p>　　a.裸鼠皮下分別接種107 T-cadherin（+）或（-）的肝癌細(xì)胞（各20只）</p><p>　　b.觀察：腫瘤生長(zhǎng)速度</p><p>　　腫瘤轉(zhuǎn)移發(fā)生的時(shí)間、累及積器官及頻率</p><p><b>　　裸鼠的生存期</b>&

46、lt;/p><p>　　3.研究T-cadherin基因在肝癌中腫瘤抑制功能的分子機(jī)制</p><p>　　a.流式細(xì)胞儀檢測(cè)表達(dá)T-cadherin陽(yáng)性和陰性的肝癌細(xì)胞的細(xì)胞周期變化</p><p>　　b.Western blot檢測(cè)細(xì)胞周期調(diào)控蛋白p53,p21,p27,cyclin D的表達(dá)變化</p><p>　　c.研究是否T-cad

47、herin分子在肝癌中同樣存在誘導(dǎo)P21 CIP1/WAF1表達(dá)致使肝癌細(xì)胞于細(xì)胞周期G2期阻滯的分子機(jī)制。</p><p>　　二、研究T-cadherin基因失活與臨床肝癌惡性分化程度、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)等惡性生物學(xué)特征的關(guān)系的技術(shù)路線</p><p>　　1.收集臨床手術(shù)切除的肝癌標(biāo)本及癌周肝組織各50例</p><p>　　a. 檢測(cè)T-cadherin表達(dá)：

48、定量PCR；免疫組織化學(xué)；Western blot </p><p>　　b.比較肝癌與癌周肝組織中T-cadherin的表達(dá)水平，研究T-cadherin缺失表達(dá)（基因失活）與人肝癌發(fā)生的關(guān)系。</p><p>　　c. 比較不同病例肝癌中T-cadherin的表達(dá)水平，研究T-cadherin表達(dá)水平與腫瘤病理分級(jí)、肝內(nèi)轉(zhuǎn)移（包括合并門靜脈癌栓和衛(wèi)星灶形成）的關(guān)系。</p>

49、<p>　　2.結(jié)合臨床病案記錄，選擇臨床分期相同、病理類型一致、單個(gè)腫瘤大小在2~5cm之間、無(wú)肝內(nèi)外轉(zhuǎn)移、行根治性切除后采用同樣的治療方案的肝癌病例，分別選取肝癌切除術(shù)后半年內(nèi)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移以及2年內(nèi)未復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的肝癌石蠟標(biāo)本各20例</p><p>　　a. 檢測(cè)T-cadherin表達(dá)： 免疫組織化學(xué)</p><p>　　b. 回顧研究T-cadherin表達(dá)水平與腫瘤

50、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的關(guān)系</p><p>　　三、研究去甲基化藥物誘導(dǎo)T-cadherin表達(dá)及其治療學(xué)意義的技術(shù)路線。</p><p>　　1.研究表明T-cadherin在肝癌細(xì)胞株HepG2, PLC/PRF/C, TONG 和HA22TNGH中缺失。采用Herman已報(bào)導(dǎo)的檢測(cè)T-cadherin啟動(dòng)子甲基化和非甲基序列的引物，進(jìn)一步證實(shí)T-cadherin在上述肝癌細(xì)胞株中的啟動(dòng)子甲基化

51、現(xiàn)象。擴(kuò)增甲基化序列引物，上游5’-TCGCGGGGTTCGTTTTCGC-3’，下游5’-GACGTTTTCATTCATACGCG-3’，擴(kuò)增非甲化序列引物，上游5’-TTGTGGGGTTGTTTTGT-3’，下游5’-AACTTTTCATTCATACACACA-3’。 采用Western blot進(jìn)一步證實(shí)T-cadherin在上述存在的啟動(dòng)子甲基化肝癌細(xì)胞株中蛋白水平表達(dá)缺失。</p><p>　　2.選擇

52、T-cadherin啟動(dòng)子高度甲基化的細(xì)胞株與去甲基化藥物5-aza-2’-deoxycytidine（2ug/ml）作用6天后，采用Western blot檢測(cè)T-cadherin蛋白水平表達(dá); 采用細(xì)胞增殖計(jì)數(shù)、3H標(biāo)胸腺嘧啶攝取率測(cè)定、克隆增殖試驗(yàn)、細(xì)胞粘附試驗(yàn)和細(xì)胞聚集試驗(yàn)檢測(cè)T-cadherin表達(dá)前后肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)特征的變化。</p><p>　　3.將T-cadherin啟動(dòng)

53、子高度甲基化的細(xì)胞株（細(xì)胞數(shù)1x107）分別接種60只裸鼠后隨機(jī)分成兩組（每組30只），治療組再分成五組（每組6只），每組分別按0.5ug、1ug、2ug、4ug、8ug/克體重每日皮下注射5-aza-2’-deoxycytidine，共注射一周，對(duì)照組僅注射生理鹽水，觀察不同組裸鼠的腫瘤生長(zhǎng)速度、腫瘤轉(zhuǎn)移發(fā)生的時(shí)間、累及器官及頻率及裸鼠的生存期。</p><p>　　4、項(xiàng)目的特色及創(chuàng)新之處</p>

54、<p>　　1．近年已開(kāi)始有T-cadherin分子在肝癌、乳腺癌、肺癌及結(jié)直腸癌中表達(dá)顯著下降、缺失的報(bào)導(dǎo)，推測(cè)T-cadherin分子在這些腫瘤中可能扮演腫瘤抑制基因角色。 申請(qǐng)人（黃志勇）最新研究首次證實(shí)T-cadherin在大鼠腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中的腫瘤抑制基因功能，并首次揭示其腫瘤抑制功能的分子機(jī)制（Huang Zhiyong等，Molecular and Cellular Biology 2003,23:566-5

55、78）。但目前尚無(wú)人對(duì)T-cadherin在肝癌中的基因功能及其分子機(jī)制進(jìn)行研究?；谏暾?qǐng)人前期世界領(lǐng)先的研究工作基礎(chǔ)，該研究將進(jìn)一步揭示T-cadherin分子在肝癌中的基因功能和其分子機(jī)制，具有世界先進(jìn)性和獨(dú)創(chuàng)性。</p><p>　　2. Cadherin分子，如E-，N-cadherin分子缺失或突變與多種腫瘤的發(fā)生及轉(zhuǎn)移特征密切相關(guān)，但目前對(duì)T-cadherin基因失活與肝癌的侵犯及轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特征的關(guān)

56、系目前尚無(wú)研究，該研究具有先進(jìn)性和獨(dú)創(chuàng)性。</p><p>　　3.T-cadherin基因啟動(dòng)子甲基化在肝癌中具有特異性,且 T-cadherin基因啟動(dòng)子甲基化與T-cadherin基因失活密切相關(guān)。但對(duì)應(yīng)用去甲基化藥物誘導(dǎo)T-cadherin表達(dá)并研究其對(duì)肝癌的治療學(xué)意義目前尚無(wú)研究。該研究具有創(chuàng)新性和實(shí)用性。</p><p>　　4.該研究的獨(dú)到之處在于揭示最新腫瘤抑制基因T-c

57、adherin基因失活與肝癌惡性生物學(xué)特征的關(guān)系以及去甲基化藥物對(duì)肝癌的治療作用，該研究對(duì)進(jìn)一步揭示肝癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制、研究更有效的治療藥物具有重要的科學(xué)及臨床意義。</p><p>　　5、年度研究計(jì)劃及預(yù)期研究成果</p><p><b>　　研究計(jì)劃及進(jìn)度：</b></p><p>　　2005.1-2005.12 在肝癌細(xì)胞株和

58、裸鼠肝癌模型上研究T-cadherin在肝癌中的基因功能。證實(shí)是否T-cadherin抑制肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)特征。揭示T-cadherin基因表達(dá)抑制肝癌細(xì)胞惡性生物學(xué)特征的分子機(jī)制。</p><p>　　2006.1-2006.12 在臨床切除的肝癌標(biāo)本中研究T-cadherin基因失活與肝癌惡性分化程度、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)等惡性生物學(xué)特征的關(guān)系，揭示T-cadherin的腫瘤抑制基因功能失活與臨

59、床肝癌的惡性生物學(xué)特征及預(yù)后的關(guān)系。</p><p>　　2007.1-2007.12在肝癌細(xì)胞株和裸鼠種植肝癌模型上研究去甲基化藥物是否能重新誘導(dǎo)T-cadherin表達(dá)，并抑制肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)特征，觀察其對(duì)肝癌的潛在的治療價(jià)值治療作用和可能的毒副作用。</p><p><b>　　預(yù)期研究成果：</b></p><p>

60、;　　1.在國(guó)際上有影響的刊物發(fā)表論文3-4篇，在國(guó)內(nèi)權(quán)威期刊上發(fā)表論文8-10篇。</p><p>　　2.預(yù)期科研成果3項(xiàng)：</p><p>　　a.T-cadherin基因在肝癌中的基因功能及其機(jī)制</p><p>　　b.T-cadherin基因失活與肝癌惡性生物學(xué)特征的關(guān)系</p><p>　　c.利用去甲基化試劑誘導(dǎo)T-cadhe

61、rin表達(dá)對(duì)肝癌的治療學(xué)價(jià)值</p><p>　?。ǘ┭芯炕A(chǔ)與工作條件</p><p><b>　　1、工作基礎(chǔ)：</b></p><p>　　申請(qǐng)人從事腫瘤發(fā)生的分子機(jī)制，肝癌的免疫及基因治療研究多年，發(fā)表研究論文19篇，其中6篇被SCI收錄，影響因子多達(dá)40。在美國(guó)華盛頓大學(xué)神經(jīng)腫瘤及分子遺傳研究室從事神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤發(fā)生的分子機(jī)制的研究工

62、作近4年，主要從事腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制，利用基因芯片尋找與腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)的遺傳改變，并利用已知的腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤的遺傳改變，如Ras激活突變， NF1基因缺失，cdk4過(guò)表達(dá)，P53及Rb缺失，并在動(dòng)物模型上進(jìn)一步驗(yàn)證上述遺傳改變與腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。首次利用GFAP啟動(dòng)子成功地建立了腦膠質(zhì)細(xì)胞特異性CDK4基因過(guò)表達(dá)的動(dòng)物模型，并揭示了CDK4過(guò)表達(dá)與P53基因缺失對(duì)腦膠質(zhì)細(xì)胞增殖的協(xié)同作用。該文發(fā)表于Onc

63、ogene 2002, 21:1325-1334（影響因子 6.0）。該CDK4轉(zhuǎn)基因鼠系正在申請(qǐng)美國(guó)專利。同時(shí)，探索研究新基因如T-cadherin和GAP43基因?qū)δX膠質(zhì)細(xì)胞瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)特征的關(guān)系，首次發(fā)現(xiàn)T-cadherin和GAP43是兩個(gè)重要的參與腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤生長(zhǎng)調(diào)控的基因，并揭示其調(diào)節(jié)機(jī)制。論文分別發(fā)表于 Molecular and C</p><p>　　在對(duì)T-cadherin基因的研

64、究中，首次證明了細(xì)胞粘附分子T-cadherin是抑制腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)特征的重要腫瘤抑制基因，并揭示其分子機(jī)制是T-cadherin分子通過(guò)誘導(dǎo)P21 CIP1/WAF1表達(dá)致使腫瘤細(xì)胞于細(xì)胞周期G2期阻滯。該文發(fā)表于Molecular and Cellular Biology 2003,23:566-578。這一研究發(fā)現(xiàn)為進(jìn)一步研究T-cadherin分子在肝癌中的作用、功能及臨床意義奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。</p&

65、gt;<p>　　2 \前期關(guān)于T-cadherin研究的基礎(chǔ)工作：</p><p>　　黃志勇等,Molecular and Cellular Biology,23:566-578</p><p>　　黃志勇等,Molecular and Cellular Biology,23:566-578</p><p>　　黃志勇等,Molecular and

66、 Cellular Biology,23:566-578</p><p>　　黃志勇等,Molecular and Cellular Biology,23:566-578</p><p>　　黃志勇等,Molecular and Cellular Biology,23:566-578</p><p>　　黃志勇等,Molecular and Cellular Bio

67、logy,23:566-578</p><p>　　黃志勇等,Molecular and Cellular Biology,23:566-578</p><p>　　黃志勇等,Molecular and Cellular Biology,23:566-578</p><p><b>　　已發(fā)表的相關(guān)論文:</b></p><

68、p>　　1.Huang Zhi-yong, YanLi Wu, Nicole Hedrick and David H.Gutmann. T-cadherin-mediated cell regulation involves G2 phase arrest and requires p21CIP1/WAF1 expression. Molecular and Cellular Biology, 2003, 23:566-578

69、（影響因子 8.8）</p><p>　　2. Huang Zhi-yong, YanLi Wu, Stephen P. Burke and David H. Gutmann. The 43 kDa growth-associated protein functions as a negative growth regulator in glioma. Cancer Res, 2003, 63: 2933-293

70、9 （影響因子 8.3）</p><p>　　3. Huang Zhi-yong, Rebecca L.Baldwin,Nicole M.Hedrick and David H. Gutmann. Astrocyte specific expression of cdk4 is not sufficient for tumor formation, but cooperates with p53 heterozy

71、gosity to provide a growth advantage for astrocytes in vivo. Oncogene, 2002,21:1325-1334 （影響因子 6.0）</p><p>　　4.David H. Gutmann, Huang Zhi-yong, Nicole M.Hedrick, Hao Ding, Abhijit Guha and Mark A. Watson. M

72、ouse glioma gene expression profiling identifies novel human glioma -associated genes. Annals of Neurology, 2002,51:393-405 （影響因子 8.6）</p><p>　　5.David H. Gutmann, Hirbe,A.C., and Huang zhi-yong and Carrie A

73、.Haipek. The protein 4.1 tumor suppressor, DAL-1, impairs cell molotity, but regulates proliferation in a cell-type-specific fashion. Neurobiology of disease 8,266-278 （影響因子 5.2）</p><p>　　6.Xiao-ping Chen, Z

74、ai-de Wu, Zhi-yong Huang and Fa-zu Qiu .The use of hepatectomy and splenectomy to treat hepatocellular carcinoma with cirrhotic hypersplenism. British Journal of Surgery 2004;91(3):322-326（影響因子 3.3）</p><p>　

75、　7.Huang Zhi-yong, et al. Transgenic mouse modeling of the chromosome 12Q13-Q15 amplification in astrocytoma pathogenesis. Neuro-oncology 2001; 3(4): 302</p><p>　　8.Huang Zhi-yong, et al. Identification of a

76、dditional genetic events associated with neurofibromatosis 1(NF1) pilocytic astrocytoma pathogenesis. Neuro-Oncology, 2001; 3(4): 301</p><p>　　9.Huang zhiyong, et al. Functional characterization of a novel h

77、uman astrocytoma “tumor suppressor” identified by gene expression profiling of mouse transgenic astrocytomas. Neuro-oncology 2002; 4(4): 313</p><p>　　10.Huang zhiyong, et al. A novel cadherin moleculer funct

78、ions as an astrocytoma tumor suppressor, Neuro-oncology, 2002; 4(4): 313</p><p>　　11. Angela Hirbe, Carrie Haipek, Huang zhi-yong. DAL-1 is a protein 4.1 tumor suppressor for leptomeningeal cells. Abstract f

79、or 92nd annual meeting, American Association for Cancer Research, 2001, New Orleans, LA</p><p><b>　　2、工作條件</b></p><p>　　我院普通外科是國(guó)家重點(diǎn)學(xué)科，長(zhǎng)期以來(lái)又以肝臟外科為重點(diǎn)，在裘法祖、吳在德、陳孝平教授的領(lǐng)導(dǎo)下已培養(yǎng)出碩士、博士研究生60余名

80、。肝癌發(fā)病的分子機(jī)制及綜合治療一直是我科的重點(diǎn)研究項(xiàng)目，已發(fā)表研究論文三百余篇。近年來(lái)基本外科實(shí)驗(yàn)室已投資近200萬(wàn)元增購(gòu)儀器設(shè)備，配備充足的研究人員, 已具備從事相關(guān)分子生物學(xué)研究、細(xì)胞學(xué)研究及動(dòng)物試驗(yàn)研究的實(shí)驗(yàn)條件。本院肝臟外科中心擁有床位78張，具有收集足夠病例完成臨床研究的能力和條件。以上各項(xiàng)為我們完成本課題打下良好基礎(chǔ)。</p><p>　　簽字和蓋章頁(yè)(此頁(yè)自動(dòng)生成,打印后簽字蓋章) </p&

81、gt;<p>　　申 請(qǐng) 者： 依托單位：華中科技大學(xué) </p><p>　　項(xiàng)目名稱：T-cadherin基因失活與原發(fā)性肝癌惡性生物學(xué)特征的關(guān)系及其臨床意義 </p><p>　　資助類別：面上項(xiàng)目 亞類說(shuō)明：自由申請(qǐng)項(xiàng)目 </p><p><b>

82、;　　附注說(shuō)明： </b></p><p><b>　　申請(qǐng)者承諾：</b></p><p>　　我保證申請(qǐng)書內(nèi)容的真實(shí)性。如果獲得基金資助，我將履行項(xiàng)目負(fù)責(zé)人職責(zé)，嚴(yán)格遵守國(guó)家自然科學(xué)基金委員會(huì)的有關(guān)規(guī)定，切實(shí)保證研究工作時(shí)間，認(rèn)真開(kāi)展工作，按時(shí)報(bào)送有關(guān)材料。若填報(bào)失實(shí)和違反規(guī)定，本人將承擔(dān)全部責(zé)任。</p><p>　　簽字：

83、 </p><p>　　項(xiàng)目組主要成員承諾：</p><p>　　我保證有關(guān)申報(bào)內(nèi)容的真實(shí)性。如果獲得基金資助，我將嚴(yán)格遵守國(guó)家自然科學(xué)基金委員會(huì)的有關(guān)規(guī)定，切實(shí)保證研究工作時(shí)間，加強(qiáng)合作、信息資源共享，認(rèn)真開(kāi)展工作，及時(shí)向項(xiàng)目負(fù)責(zé)人報(bào)送有關(guān)材料。若個(gè)人信息失實(shí)、執(zhí)行項(xiàng)目中違反規(guī)定，本人將承擔(dān)相關(guān)責(zé)任。</p><p>　　依托單位及合作單

84、位承諾：</p><p>　　已按填報(bào)說(shuō)明對(duì)申請(qǐng)人的資格和申請(qǐng)書內(nèi)容進(jìn)行了審核。申請(qǐng)項(xiàng)目如獲資助，我單位保證對(duì)研究計(jì)劃實(shí)施所需要的人力、物力和工作時(shí)間等條件給予保障，嚴(yán)格遵守國(guó)家自然科學(xué)基金委員會(huì)有關(guān)規(guī)定，督促項(xiàng)目負(fù)責(zé)人和項(xiàng)目組成員以及本單位項(xiàng)目管理部門按照國(guó)家自然科學(xué)基金委員會(huì)的規(guī)定及時(shí)報(bào)送有關(guān)材料。</p><p>　　依托單位公章 合作單位公章1