厚垣孢普可尼亞菌PC152菌株生物學(xué)及制劑工藝研究.pdf

1、厚垣孢普可尼亞菌[Pochonia chlamydosporia(Goddard)Zare& W.Gams]是重要的植物寄生線蟲生防菌,該菌最顯著的特征是能產(chǎn)生厚壁的、磚格狀的厚垣孢子,對(duì)防治植物線蟲病害具有較大的生防潛力。本文對(duì)P.chlamydosporia菌株P(guān)C152的生物學(xué)特性、產(chǎn)孢條件、雙相發(fā)酵工藝、制劑和防效等方面進(jìn)行了研究,取得如下結(jié)果:
　　 P.chlamydosporia152菌株在3種不同培養(yǎng)基(PSA、

2、CMA及Czapek培養(yǎng)基)上都很容易生長(zhǎng),其生長(zhǎng)速度無顯著差異,28℃黑暗培養(yǎng)15d菌落直徑分別為5.95cm、6.00cm、6.10cm。
　　 用水瓊脂平板法對(duì)厚垣孢普可尼亞菌菌株P(guān)C152的生防潛力進(jìn)行了初步的評(píng)估,結(jié)果表明菌株P(guān)C152在離體條件下對(duì)南方根結(jié)線蟲的卵、雌蟲和卵囊寄生率分別為92.50％、98.65％、86.20％。被寄生的卵內(nèi)充滿菌絲或?yàn)榭諝?卵粒畸形、皺縮。菌絲可定殖于完整卵囊表面及膠質(zhì)層內(nèi),卵囊內(nèi)的

3、卵也能被寄生。該菌對(duì)雌蟲也具有致病性,被寄生的雌蟲蟲體變形皺縮。通過室內(nèi)試驗(yàn),無菌條件下該菌株對(duì)植株根系的定殖率達(dá)80％以上,30d后在根際土壤中定殖的成菌落數(shù)(CFU)為4.30×106 cfu·g-1。
　　 通過兩步培養(yǎng)法試驗(yàn),以Czapek培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,明確了P.chlamydosporia152菌株平板產(chǎn)厚垣孢子的最適條件:初始碳源濃度為3.0g·L-1,碳氮比(摩爾比)為2.5:1,最佳碳氮源組合為蔗糖／NaN

4、O3,培養(yǎng)基最佳pH為8,質(zhì)量分?jǐn)?shù)(W／V)為1.00％NaCl能誘導(dǎo)產(chǎn)孢,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中主要營(yíng)養(yǎng)元素缺失,尤其是磷元素缺失能促進(jìn)厚垣孢子的形成,提高厚垣孢子的產(chǎn)量。
　　 以產(chǎn)孢量和菌絲球數(shù)量為指標(biāo),篩選出了適合菌株P(guān)C152液體發(fā)酵的培養(yǎng)基配方及發(fā)酵條件為:濃度(W／V)的3％蝦殼粉,500mL三角瓶裝量200mL培養(yǎng)液,初始接種量為1／10(V／V),28℃、150r·min-1搖床振蕩培養(yǎng),初始pH值為4～5；用10L發(fā)酵

5、罐對(duì)厚垣孢普可尼亞菌進(jìn)行液體發(fā)酵試驗(yàn),72h時(shí)產(chǎn)孢量達(dá)1.82×108個(gè)·mL-1,獲得的參數(shù)理論上較接近大罐發(fā)酵試驗(yàn),可為大罐生產(chǎn)提供參考依據(jù)。
　　 以厚垣孢子產(chǎn)量為指標(biāo),通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn),確定該菌的固體發(fā)酵條件為:以30～50目的玉米粉為主要培養(yǎng)基原料、玉米粉:菌草為7:3,蔗糖1.5％,NaNO30.85％,NaCl1.0％,料水比為1:0.5(g·mL-1),接種量為0.50 mL·g-1,以48～60h的蝦殼

6、粉發(fā)酵液作為固態(tài)發(fā)酵的接種體,初始pH7～8。
　　 PC152菌劑生產(chǎn)采用液固雙相發(fā)酵工藝,在發(fā)酵罐的蝦殼粉培養(yǎng)液中發(fā)酵48～60h后,將發(fā)酵液接種到上述玉米粉固體培養(yǎng)基上進(jìn)行固體發(fā)酵,在此條件下培養(yǎng)10d,厚垣孢子產(chǎn)量達(dá)1.50×106個(gè)·g-1,分生孢子產(chǎn)量達(dá)4.00×109個(gè)·g-1。
　　 通過對(duì)載體、助劑的篩選,以潤(rùn)濕時(shí)間、懸浮率為指標(biāo)進(jìn)行正交試驗(yàn),確定了厚垣孢普可尼亞菌PC152菌株可濕性粉劑的配方為:潤(rùn)濕

7、劑吐溫-805.O％、分散劑PEG60005.0％、紫外保護(hù)劑葉酸0.90％、載體硅藻土45％,以孢子粉(含有厚垣孢子和分生孢子)補(bǔ)足至100％。按照相關(guān)工藝配制可濕性粉劑,測(cè)定相關(guān)質(zhì)量指標(biāo),結(jié)果為:活菌量≥3.28×109 cfu·g-1,潤(rùn)濕時(shí)間≤29.81 s,懸浮率≥75.80％。通過盆栽試驗(yàn)測(cè)定該菌劑對(duì)蔬菜根結(jié)線蟲病的防治效果,結(jié)果表明,菌劑番茄、空心菜根結(jié)線蟲病的相對(duì)防效分別為70.59％、71.43％,該菌株在土壤中能較好