捕食性真菌-Duddingtonia flagrans胞外蛋白酶的誘導與純化及其性質研究.pdf

1、為確定捕食線蟲性真菌-Duddingtonia flagrans分泌產生胞外蛋白酶的最佳培養(yǎng)基及誘導物，并對胞外蛋白酶的生化性質進行研究。本論文首先利用含不同誘導物的LMZ培養(yǎng)基、枸椽酸培養(yǎng)基及大豆蛋白胨培養(yǎng)基，分別對Duddingtonia flagrans進行培養(yǎng)，將產生的發(fā)酵液過濾后，測定其蛋白質含量、蛋白酶及磷酸酶活性，并用發(fā)酵液進行殺蟲試驗；在確定Duddingtonia flagrans產生胞外蛋白酶的最佳培養(yǎng)基及誘導物的基

2、礎上，利用其培養(yǎng)Duddingtonia flagrans并收集發(fā)酵液，然后分別用硫酸銨鹽析粗提發(fā)酵液中的胞外蛋白質，對粗提物進行蛋白質含量、蛋白酶活性、磷酸酶活性及殺蟲作用的研究，確定鹽析沉淀粗提胞外蛋白質的最佳鹽濃度；在此基礎上，收集胞外蛋白質粗提物，通過SephadexG-100分子篩對其層析純化，并檢測酶活性，繼而對純化的具有酶活性的胞外蛋白質即胞外蛋白酶進行生化性質研究。
　　結果顯示：1.用不同誘導物和培養(yǎng)基培養(yǎng)Dud

3、dingtonia flagrans，其發(fā)酵液中蛋白質種類、濃度、蛋白酶和磷酸酶活性及殺蟲作用顯著不同，其中馬圓線蟲誘導的枸椽酸培養(yǎng)基發(fā)酵液蛋白質種類和含量最多，蛋白酶和磷酸酶活性最高，殺蟲作用最強。此外試驗還證實Duddingtonia flagrans發(fā)酵液不僅具有殺線蟲活性，而且也具備殺蠅蛆作用。2.采用不同鹽濃度從Duddingtonia flagrans發(fā)酵液中鹽析粗提的蛋白質性質和種類不同，其中硫酸銨飽和度在45％～65%的

4、粗提物蛋白質含量最高、種類最多、酶活性與殺線蟲作用最強，且硫酸銨不會破壞胞外蛋白質的結構與活性。3.被純化的3種胞外蛋白酶分子量約為63KDa、38KDa、19KDa，這3種胞外蛋白酶酶活性的pH和溫度范圍都比較大，其最適PH為6.5、最適溫度為50℃。不同酶抑制劑對3種胞外蛋白酶抑制作用不同。其中菲羅啉和抑肽素對分子量63KDa、19KDa的胞外蛋白酶抑制作用很強，而PMSF對分子量38KDa的胞外蛋白酶抑制作用很強。
　　上述