阿魏化學(xué)成分對阿魏側(cè)耳菌絲生長及蛋白質(zhì)表達的研究.pdf

1、野生阿魏菇腐生（或寄生）在傘形科植物阿魏的根莖部，研究以阿魏菇NB-1和準噶爾阿魏為材料，通過活性引導(dǎo)分離阿魏化學(xué)成分。研究不同化學(xué)組分對阿魏菇菌絲生長、多種保護酶活性，以及蛋白質(zhì)表達產(chǎn)生的影響，探索阿魏中的化學(xué)物質(zhì)對阿魏菇菌絲生長的生物效應(yīng)。研究的主要結(jié)果如下：
　　 （1）準噶爾阿魏肉質(zhì)根莖，95%乙醇提取。提取物(Extracts)采用不同溶劑萃取，得到石油醚萃取物(Ex.P)、三氯甲烷萃取物(Ex.T)、乙酸乙酯萃取物(

2、Ex.EA)、水相萃余物(R)?；钚砸龑?dǎo)選擇三氯甲烷萃取物(Ex.T)，采用硅膠柱分離，活性引導(dǎo)選擇Ex.Tc，再次硅膠柱分離，活性引導(dǎo)選擇Ex.Tc.3進行質(zhì)譜鑒定，發(fā)現(xiàn)Ex.Tc.3有7個主要的化學(xué)成分。
　　 （2）Extracts對阿魏菇菌絲生長試驗表明，低添加量對菌絲生長的促進作用顯著優(yōu)于CK，高濃度時表現(xiàn)出對菌絲生長促進的抑制作用。Ex.P、Ex.T、Ex.EA、R，均表現(xiàn)出對阿魏菇菌絲生長的促進作用，但以Ex.T效

3、果最好。Ex.T采用柱分離得到的12個組分中，有10個組分表現(xiàn)出對阿魏菇菌絲生長的促進作用，其中以Ex.Tc的效果最好。Ex.Tc柱分離得到6個組分，與CK相比對菌絲生長有明顯的促進作用，其中Ex.Tc.3的效果最好。低濃度的Ex.Tc.3對阿魏菇菌絲生長沒有明顯的促進作用，高濃度時對菌絲的生長產(chǎn)生抑制作用。
　　 （3）與CK相比，Ex.T、Ex.Tc、Ex.Tc.3均能提高阿魏菇菌絲體CAT、POD、SOD活力。隨著培養(yǎng)基中

4、Ex.T和Ex.Tc添加量的增加，阿魏菇菌絲體CAT活力呈現(xiàn)逐漸提高的趨勢，表現(xiàn)出很強的劑量效應(yīng)，Ex.Tc.3對菌絲體CAT活力具有雙重效應(yīng)。隨著培養(yǎng)基中Ex.T添加量的增加，阿魏菇菌絲體POD活力呈現(xiàn)逐漸提高的趨勢，Ex.Tc和Ex.Tc.3對菌絲體POD活力具有雙重效應(yīng)。Ex.T對阿魏菇菌絲體SOD活力具有雙重效應(yīng)，隨著培養(yǎng)基中Ex.Tc和Ex.Tc.3添加量的增加阿魏菇菌絲體SOD活力呈逐漸提高的趨勢，兩者之間具有劑量效應(yīng)。Ex

5、.T、Ex.Tc、Ex.Tc.3對阿魏菇菌絲體PPO活力的影響均表現(xiàn)出雙重作用，低濃度時能提高阿魏菇菌絲體PPO活力，高濃度時對菌絲體PPO活力產(chǎn)生抑制作用。
　　 （4）雙向凝膠電泳從CK中能清晰的分離到826個蛋白點，從Ex-P中能清晰的分離到592個蛋白質(zhì)點，從Ex.T-P中能清晰的分離到697個蛋白質(zhì)點。CK和Ex-P共有397個蛋白點匹配，匹配率為55.99%，Ex-P中有134個蛋白點較CK發(fā)生了明顯的上調(diào)，有113

6、個蛋白點發(fā)生了明顯的下調(diào)。CK和Ex.T-P共有571個蛋白點匹配，匹配率為74.98%，Ex.T-P中有170個蛋白點較CK發(fā)生了明顯的上調(diào)，有112個蛋白點發(fā)生了明顯的下調(diào)。Ex.T-P和Ex-P共有359個蛋白點匹配，匹配率為55.70%，Ex-P中有113個蛋白點較Ex.T-P發(fā)生了明顯的上調(diào)，有97個蛋白點發(fā)生了明顯的下調(diào)。在培養(yǎng)基中添加Extracts、Ex.T抑制了菌絲體中pI 5.0-pI 8.0蛋白的表達，Extrac

7、ts能促進菌絲體中pI 4.0-pI 5.0（酸性）蛋白的表達，Ex.T能促進菌絲體中pI 7.0- pI 9.0（偏堿性）蛋白的表達。與CK相比Extracts和Ex.T均能促進阿魏菇菌絲體小分子量蛋白的表達，而對高分子量蛋白的表達卻產(chǎn)生了顯著地抑制作用，Extracts對阿魏菇菌絲體小分量蛋白的激活表達作用最為明顯。
　　 （5）質(zhì)譜鑒定差異蛋白點Spot 748為假想蛋白MPER_07859，Spot 1180為1,4-苯