玉米螟生防工程菌株構建的研究.pdf

1、玉米螟是世界性重大農業(yè)害蟲之一,危害嚴重且分布極廣。因其繁殖快、世代多以及較強的農藥抗性,對其進行化學防治將面臨越來越大的困難。因此,尋找高效、安全、環(huán)保的農藥替代物已成為亟待解決問題。
　　 在本研究中,以玉米和亞洲玉米螟Ostrinia furnacalis作為研究對象,在明確茉莉酸甲酯(Methyl jasmonate,MJA)誘導玉米抗性反應影響亞洲玉米螟生長發(fā)育基礎上通過雙向電泳和MS技術鑒定了60個響應MJA處理的差

2、異表達蛋白,并對其進行了功能分析。對4個重要植物防御相關蛋白編碼基因構建了原核表達載體并成功誘導了重組蛋白,利用生物測定的方法驗證了重組蛋白對亞洲玉米螟生物學活性的影響。其中,pET28a-TRX和pET28a-PRP表達的重組蛋白對亞洲玉米螟幼蟲的生長發(fā)育產生了顯著影響,生長抑制率分別達30.33％和34.14％。pET28a-GRBP表達的融合蛋白亦對蛹重有顯著影響,這暗示我們所獲得的玉米防御蛋白可能是一種良好的植物抗蟲蛋白。

3、>　　 谷胱甘肽-S-轉移酶是昆蟲體內一類重要解毒酶系,它對許多有毒化合物具有代謝消化作用,從而增強昆蟲的抗性。采用RT-PCR和RACE技術從亞洲玉米螟中腸中克隆了一個谷胱甘肽-S-轉移酶基因,將其命名為OfGST,并進行了生物信息學分析。以此為基礎,構建了原核表達載體并進行融合蛋白誘導表達,以純化的重組蛋白制備了多克隆抗體。Western blot分析顯示該解毒酶經丁布誘導后表達量增加,至24h時最大。同時,利用表達載體L4440