玉米螟生防工程菌株構(gòu)建的研究.pdf

1、玉米螟是世界性重大農(nóng)業(yè)害蟲之一,危害嚴(yán)重且分布極廣。因其繁殖快、世代多以及較強的農(nóng)藥抗性,對其進(jìn)行化學(xué)防治將面臨越來越大的困難。因此,尋找高效、安全、環(huán)保的農(nóng)藥替代物已成為亟待解決問題。
　　 在本研究中,以玉米和亞洲玉米螟Ostrinia furnacalis作為研究對象,在明確茉莉酸甲酯(Methyl jasmonate,MJA)誘導(dǎo)玉米抗性反應(yīng)影響亞洲玉米螟生長發(fā)育基礎(chǔ)上通過雙向電泳和MS技術(shù)鑒定了60個響應(yīng)MJA處理的差

2、異表達(dá)蛋白,并對其進(jìn)行了功能分析。對4個重要植物防御相關(guān)蛋白編碼基因構(gòu)建了原核表達(dá)載體并成功誘導(dǎo)了重組蛋白,利用生物測定的方法驗證了重組蛋白對亞洲玉米螟生物學(xué)活性的影響。其中,pET28a-TRX和pET28a-PRP表達(dá)的重組蛋白對亞洲玉米螟幼蟲的生長發(fā)育產(chǎn)生了顯著影響,生長抑制率分別達(dá)30.33％和34.14％。pET28a-GRBP表達(dá)的融合蛋白亦對蛹重有顯著影響,這暗示我們所獲得的玉米防御蛋白可能是一種良好的植物抗蟲蛋白。

3、>　　 谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶是昆蟲體內(nèi)一類重要解毒酶系,它對許多有毒化合物具有代謝消化作用,從而增強昆蟲的抗性。采用RT-PCR和RACE技術(shù)從亞洲玉米螟中腸中克隆了一個谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶基因,將其命名為OfGST,并進(jìn)行了生物信息學(xué)分析。以此為基礎(chǔ),構(gòu)建了原核表達(dá)載體并進(jìn)行融合蛋白誘導(dǎo)表達(dá),以純化的重組蛋白制備了多克隆抗體。Western blot分析顯示該解毒酶經(jīng)丁布誘導(dǎo)后表達(dá)量增加,至24h時最大。同時,利用表達(dá)載體L4440