雙孢蘑菇褐化相關(guān)PPO基因的研究及香茹EST-SSR標(biāo)記的建立.pdf

1、本論文共有兩個(gè)部分。
　　 (一)雙孢蘑菇褐變相關(guān)多酚氧化酶(PPO)的研究
　　 (1)雙孢蘑菇在儲(chǔ)藏過程中容易發(fā)生褐變，影響其食用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。本研究通過研究雙孢蘑菇儲(chǔ)藏過程中的褐變度、總酚含量、多酚氧化酶(PPO)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)酶活性變化，探討其褐變機(jī)理，以期尋找抑制其褐化的途徑。結(jié)果顯示，PPO與雙孢蘑菇褐化有著密切的聯(lián)系，但其褐變機(jī)制有待于進(jìn)一步的研究。
　　 (2)從雙孢蘑菇中分離和克隆

2、了2個(gè)PPO同源基因的基因組序列，PPO3和PPO4，長(zhǎng)度分別為2080bp和2189bp，對(duì)其序列信息進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)PPO3和PPO4都有7個(gè)外顯子和6個(gè)內(nèi)含子，外顯子和內(nèi)含子的連接區(qū)高度保守，符合真核基因的GT-AG剪接法則，且含有典型的CuA，CuB結(jié)構(gòu)域。
　　 (3)利用染色體步移技術(shù)分別克隆2個(gè)PPO基因的啟動(dòng)子序列，長(zhǎng)度均大于1.5kb，分析發(fā)現(xiàn)包含核心啟動(dòng)子的保守元件，如TATA-Box和CAAT-Box等，以

3、及I-box、G-Box、AE-box、WUN-motif、 ARE-motif、 MYB等一些重要順式作用元件。
　　 (4)半定量的結(jié)果再次證明了PPO基因與雙孢蘑菇褐變之間的關(guān)系。
　　 (二)香菇EST-SSR標(biāo)記的建立
　　 EST-SSR標(biāo)記是基于公共數(shù)據(jù)庫(kù)中的EST或cDNA序列開發(fā)的一種分子標(biāo)記。開發(fā)香菇上可用的EST-SSR標(biāo)記對(duì)于食用菌類的遺傳育種研究有著重要的意義。
　　 本研究利用

4、生物信息學(xué)的數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)，對(duì)公共序列數(shù)據(jù)庫(kù)中香菇EST的SSR位點(diǎn)進(jìn)行了鑒定和分析，建立了香菇EST-SSR標(biāo)記，并將這些標(biāo)記應(yīng)用在香菇菌種遺傳關(guān)系的研究中，獲得了以下結(jié)果：
　　 (1)從NCBI中下載了12184條香菇EST序列，處理后得到全長(zhǎng)3681177bp的4684個(gè)Unigene。在其中共發(fā)掘出142個(gè)SSR，分布于120條Unigene中，發(fā)生頻率為2.99％(1/25.429kb)。其中，單，二，三核苷酸重復(fù)是主

5、要的重復(fù)類型，A/T,AG/CT,ACG/CTG是單，二，三核苷酸的主要重復(fù)基序，分別占所有EST-SSR的78.57％，79.49％，25.42％。
　　 (2)利用primer5.0設(shè)計(jì)了40對(duì)引物，并在35個(gè)香菇品種中進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果有36對(duì)引物顯示擴(kuò)增，占所有引物的90％，其中22對(duì)引物為多態(tài)性引物，其多態(tài)率為55％。
　　 (3)應(yīng)用NTSYS軟件的聚類方法分析表明，35份材料遺傳相似系數(shù)范圍為0.125-0.7