雙孢蘑菇SSR標(biāo)記的開(kāi)發(fā)及其在遺傳育種分析中的應(yīng)用.pdf

1、應(yīng)用MISA軟件分析了雙孢蘑菇基因組SSR位點(diǎn)組成，其中單核苷重復(fù)基序?yàn)橹鲗?dǎo)類(lèi)型，占總SSR的52.9％;其次是三、二核苷酸重復(fù)基序，其出現(xiàn)頻率分別為34.3％和11.4％。A/T、AG/CT、AAC/GTT分別是單、二、三核苷酸的主要重復(fù)基序。采用Primer5.0軟件設(shè)計(jì)引物，共設(shè)計(jì)有效擴(kuò)增SSR引物112對(duì)，經(jīng)篩選，其中97對(duì)在8份雙孢蘑菇基因組中擴(kuò)增出條帶，25對(duì)表現(xiàn)出多態(tài)性，進(jìn)一步研究表明共檢測(cè)到67個(gè)等位基因，平均每個(gè)位點(diǎn)2

2、.68個(gè)，平均Nei's基因多樣性指數(shù)為0.5023。8份雙孢蘑菇品種的遺傳相似系數(shù)變化范圍為0.3363～0.8641，平均值為0.5385;基于Nei's遺傳相似系數(shù)的UPGMA聚類(lèi)分析，在遺傳距離0.46處，8個(gè)雙孢蘑菇品種（系）分為2個(gè)類(lèi)群，親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近與其種質(zhì)來(lái)源有一定的相關(guān)性。在單孢分離子代的遺傳分析中，有19對(duì)引物在單孢分離子代中遵循孟德?tīng)栕杂煞蛛x定律。通過(guò)對(duì)溶壁酶組成及濃度、滲透壓穩(wěn)定劑、菌絲培養(yǎng)方法等研究，建立了有效

3、的雙孢蘑菇原生質(zhì)體制備與再生系統(tǒng)。實(shí)驗(yàn)利用濃度為1.5％溶壁酶，0.6M KC作為滲透壓穩(wěn)定劑，25℃酶解3-4小時(shí)，原生質(zhì)體量可達(dá)106/ml。純化后的原生質(zhì)體選擇0.6M蔗糖作為滲透壓穩(wěn)定劑，PDMA培養(yǎng)基中25℃培養(yǎng)約10天原生質(zhì)體可再生。以多態(tài)性良好的SSR引物作為鑒定同核原生質(zhì)體主要標(biāo)記，完成了對(duì)4株雙孢蘑菇同核體的鑒定。論文最后利用生物信息學(xué)的手段挖掘分析了雙孢蘑菇和其四孢亞種間的SNP和SV的差異。
　　本研究對(duì)這些