17α-Methyltestosterone和Letrozole對(duì)尼羅羅非魚性轉(zhuǎn)化影響及其性別決定機(jī)制的初步研究.pdf

1、自然條件下,羅非魚的繁殖周期較短,繁殖后代需消耗大量的能量而影響其生長(zhǎng)速度。針對(duì)羅非魚個(gè)體在生長(zhǎng)方面的性別二態(tài)性,生產(chǎn)上采用單雄性養(yǎng)殖以提高養(yǎng)殖產(chǎn)量與效益。全雄羅非魚苗種的獲得主要通過(guò)種間雜交或性激素誘導(dǎo)獲得。本文用雄性激素17α-甲基睪酮(MT)處理尼羅羅非魚魚苗,研究MT對(duì)尼羅羅非魚雄性率的影響及殘留情況,并通過(guò)熒光定量PCR的方法測(cè)定激素處理后類固醇酶基因的表達(dá)情況,同時(shí)用微衛(wèi)星方法檢測(cè)尼羅羅非魚性別相關(guān)標(biāo)記。嘗試從分子機(jī)理上闡明

2、影響性別決定的基因位點(diǎn)及影響魚類性別決定的分子機(jī)制,為人工控制魚類性別、培育單性魚以及為生產(chǎn)實(shí)踐中有效地提高群體生長(zhǎng)率、控制繁殖速度、提高商品魚的艦格和質(zhì)量提供理論基礎(chǔ),對(duì)羅非魚生產(chǎn)有指導(dǎo)意義。主要研究結(jié)果如下:
　　 1、本文采用不同濃度梯度17α-甲基睪酮(17α-Methyltestosterone,MT)飼料(5,10,30,50和60mg·kg-1)處理孵化后10天的尼羅羅非魚魚苗30天,之后改喂lF常飼料繼續(xù)進(jìn)行養(yǎng)殖

3、。經(jīng)過(guò)4個(gè)月的飼喂后,MT處理組的絕對(duì)增長(zhǎng)率、絕對(duì)增重率、瞬時(shí)增長(zhǎng)率和瞬時(shí)增重率等參數(shù)均與對(duì)照組間存在顯著差異(P<0.05)。統(tǒng)計(jì)魚茁雄性率,發(fā)現(xiàn)高濃度處理組(50mg·kg-1和60 mg·kg-1)雄性率超過(guò)99％,低濃度處理組(5mg·kg-1和10mg·kg-1)雄性率則低于80％。MT處理30天后,對(duì)照組與處理組MT殘留量分別為0μg·kg-1(對(duì)照組)<23.19μg·kg-1(5mg·kg-1)<30.82μg·kg-1

4、(10 mg·kg-1)<37.76μg·kg-1(30 mg·kg-1)<44.75μg·kg-1(50mg·kg-1)<68.41μg·kg-1(60mg·kg-1)。殘留量與MT添加量呈現(xiàn)正相關(guān)。繼續(xù)投喂正常飼料30天后,在各濃度處理組均未檢測(cè)到MT殘留。以上研究結(jié)果表明:MT處理30天可提高羅非魚苗雄性率,促進(jìn)生長(zhǎng)；MT處理后60天,均檢測(cè)不出MT殘留。
　　 2、本實(shí)驗(yàn)用濃度為l0mg·kg-1的MT、Letrozol

5、e分別腹腔注射尼羅羅非魚,在注射后12h、24h、48h、7d、14d、21d時(shí)檢測(cè)P450arom、11β-HSD2、P450Scc基因表達(dá)量。發(fā)現(xiàn)三個(gè)基因初始表達(dá)量均下降,而后回升。在用MT注射尼羅羅非魚后,檢測(cè)發(fā)現(xiàn)P450Scc基因最先受到抑制,P450arom和11β-HSD2次之；而用芳香化酶抑制劑Letrozole注射尼羅羅非魚后,檢測(cè)發(fā)現(xiàn)P450arom和P450Scc較先受到抑制,而11β-HSD2次之。這表明:MT可能

6、是通過(guò)調(diào)節(jié)P450Scc基因水平進(jìn)而降低了P450arom的表達(dá)量,而芳香化酶抑制劑Letrozole為直接調(diào)節(jié)P450arom基因進(jìn)而對(duì)魚類的性別造成影響。
　　 3、從GenBank上選取10對(duì)(UNH104,GM041,GM663,UNH168,UNH846,UNH931,UNH148,UNH985,UNH995,GM258)微衛(wèi)星引物,分別對(duì)雌雄尼羅羅羅非魚基因組進(jìn)行擴(kuò)增。結(jié)果表明:雌性尼羅羅非魚群體各位點(diǎn)的多態(tài)信息含量