利用免疫磁珠技術(shù)富集腸炎沙門氏菌和金黃色葡萄球菌.pdf

1、沙門氏菌是引起人類食物中毒的主要病原菌之一，對(duì)人和動(dòng)物均有致病性。在世界范圍內(nèi)，沙門氏菌污染肉類和蛋類引起的食物中毒仍占有很高的比例。
　　 金黃色葡萄球菌能引起多組織的感染，如引起菌血癥、心內(nèi)膜炎和肺炎等，由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒其危害程度僅次于沙門氏菌屬，是主要的食品污染細(xì)菌。
　　 免疫磁珠是指包被有相關(guān)免疫配基（-NH2，-COOH等）的磁性微粒，利用抗原抗體反應(yīng)的特異性地從混合液中分離靶物質(zhì)，具有高度專一

2、性、操作簡(jiǎn)單、不需要昂貴的儀器設(shè)備等特點(diǎn)。食品中沙門氏菌的檢驗(yàn)主要用分離培養(yǎng)方法，由于污染量少，常規(guī)檢驗(yàn)時(shí)必須進(jìn)行增菌培養(yǎng)以提高檢出率，因而耗時(shí)較長(zhǎng)，檢出率較低，難以在現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行即時(shí)的快速檢驗(yàn)。本研究應(yīng)用免疫磁性分離技術(shù)及抗體制備技術(shù)，希望能從污染菌很少的樣品中快速富集細(xì)菌，用集菌的方法代替增菌培養(yǎng)，以提高沙門氏菌和金黃色葡萄球菌的檢出率，縮短檢驗(yàn)時(shí)間，為市場(chǎng)檢疫提供更為便捷的快速檢驗(yàn)方法。
　　 1.腸炎沙門氏菌高免血清的制備將

3、腸炎沙門氏菌（Salmonellaenteritidis，SE）免疫原與弗氏佐劑乳化后免疫家兔和雞，得到抗腸炎沙門氏菌的高免血清。分別經(jīng)飽和硫酸銨粗提、G-200過(guò)柱純化和辛酸-硫酸銨鹽析法純化，獲得了兔抗SE和雞抗SE的多克隆純化抗體IgG，為應(yīng)用免疫磁珠技術(shù)富集腸炎沙門氏菌方法的建立奠定了基礎(chǔ)。
　　 2.免疫磁珠技術(shù)富集腸炎沙門氏菌和免疫磁珠的保存利用化學(xué)共沉淀的方法合成了磁性微粒，粒徑約為30～100nm，對(duì)其表面進(jìn)行硅

4、烷化和醛基化修飾。使用抗SE的多克隆抗體包被修飾后的磁性微粒，確定了磁珠與多克隆抗體的偶聯(lián)條件。試驗(yàn)結(jié)果表明：使用200μ.L免疫磁珠與菌液作用30min即可從樣品中富集到腸炎沙門氏菌，靈敏度高達(dá)3cfu/mL。該技術(shù)要優(yōu)于傳統(tǒng)的細(xì)菌分離培養(yǎng)方法。
　　 分別采取凍干法和冷藏法直接保存免疫磁珠，在不同的條件下保存一定時(shí)間后進(jìn)行吸附試驗(yàn)，結(jié)果表明凍干法保存的磁珠吸附能力降低，故不選用凍干法保存磁珠。在直接冷藏保存組中，加保護(hù)劑的免