東鄉(xiāng)野生稻cDNA文庫構(gòu)建及有利基因篩選.pdf

1、野生稻中含有豐富的有利基因，尤其是抗病蟲，抗寒耐旱方面性狀突出，但由于生殖隔離及遺傳背景知識匱乏等限制，使傳統(tǒng)雜交育種及常用的抗性基因克隆方法都難以在野生稻中利用。本課題將野生稻基因?qū)虢湍钢校媒湍竿蛔凅w功能互補技術(shù)挖掘野生稻有利基因。
　　 本課題研究的材料為東鄉(xiāng)野生稻(2n＝24)，它是世界緯度最北(位于東經(jīng)116°36′，北緯28°14′)的普通野生稻，它在－12.8～0℃低溫條件下仍能安全越冬，具宿根（多年生），再生

2、力和繁殖（無性）力強，耐旱、耐貧瘠及多種抗逆性等各種有利性狀及含胞質(zhì)不育基因、廣親和基因、恢復(fù)基因、抗病蟲基因等多種有利基因。
　　 從8℃低溫誘導(dǎo)的東鄉(xiāng)野生稻幼葉中提取總RNA，以總RNA為模板，利用MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶轉(zhuǎn)錄合成第一鏈，LDPCR擴增后，將獲得的雙鏈cDNA與構(gòu)建的酵母表達載體YPL3連接，成功構(gòu)建cDNA文庫。經(jīng)測定原始文庫滴度為4.4×10′cfu/ml；挑取16個單克隆，SfiⅠ酶切后測得平均插入片段約1kb