轉(zhuǎn)egt基因?qū)倚Q生長(zhǎng)發(fā)育的影響.pdf

1、家蠶是完全變態(tài)昆蟲(chóng)，一生經(jīng)歷卵、幼蟲(chóng)、蛹和成蟲(chóng)四個(gè)發(fā)育時(shí)期。人們希望人為調(diào)節(jié)家蠶的蛹期，以實(shí)現(xiàn)鮮繭繅絲，提高絲質(zhì)。
　　 本研究開(kāi)展了轉(zhuǎn)家蠶核型多角體病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus，BmNPV)蛻皮甾體尿苷二磷酸葡糖轉(zhuǎn)移酶(ecdysteroid UDP-glueosyhransferase，EGT)基因?qū)倚Q發(fā)育的影響。構(gòu)建了以家蠶熱休克蛋白23.7基因啟動(dòng)子(heatshock pro

2、moter23.7，hsp23.7)控制紅色熒光蛋白(Discosoma red fluorescent protein，DsRed)報(bào)告基因的瞬時(shí)表達(dá)載體，瞬時(shí)表達(dá)試驗(yàn)結(jié)果顯示，hsp23.7啟動(dòng)子可以驅(qū)動(dòng)DsRed基因在家蠶體內(nèi)及BmN培養(yǎng)細(xì)胞中表達(dá)；構(gòu)建了基于piggyBac轉(zhuǎn)座子的新型轉(zhuǎn)基因載體，該載體帶有hsp23.7驅(qū)動(dòng)的BmNPV egt表達(dá)盒和BmNPV早期基因啟動(dòng)子(ie-1)控制的新霉素抗性基因(neo)的表達(dá)盒。用

3、精子介導(dǎo)法將轉(zhuǎn)基因載體導(dǎo)入家蠶卵內(nèi)，經(jīng)過(guò)PCR、dot blotting和western blotting鑒定，成功的獲得了轉(zhuǎn)基因家蠶。發(fā)育調(diào)查結(jié)果顯示，G2代轉(zhuǎn)基因家蠶的孵化率比非轉(zhuǎn)基因家蠶低約60％、發(fā)育延緩，幼蟲(chóng)期齡期經(jīng)過(guò)比非轉(zhuǎn)基因家蠶平均延長(zhǎng)3d；蛹期比非轉(zhuǎn)基因家蠶蛹期延長(zhǎng)4d；蛻皮激素(MH)水平測(cè)定結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)基因蠶血淋巴的蛻皮激素含量明顯比非轉(zhuǎn)基因家蠶低90％，表明將egt基因?qū)爰倚Q基因組可使蠶體的MH水平下降，延緩蠶的