白頭翁、黃柏及其復(fù)方提取物對(duì)小鼠腹瀉的防治作用及安全性.pdf

1、本文按照中醫(yī)理論以白頭翁、黃柏為主要方劑設(shè)計(jì)中草藥復(fù)方,研究復(fù)方及其主要方劑對(duì)大腸桿菌的體外抑制作用以及對(duì)大腸桿菌感染小鼠的體重、采食量、腹瀉和腸道微生物區(qū)系的影響,并通過最大給藥量試驗(yàn),為白頭翁、黃柏及其復(fù)方提取物的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。試驗(yàn)一白頭翁、黃柏及其復(fù)方提取物的體外抑菌作用試驗(yàn)采用倍比稀釋法分別測定白頭翁、黃柏、白頭翁:黃柏(1:1)和中草藥復(fù)方提取物對(duì)大腸桿菌的最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC),每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)重復(fù)

2、,進(jìn)行3次重復(fù)試驗(yàn)。結(jié)果顯示,各組中藥提取液對(duì)大腸桿菌的生長均有抑制作用,其中以復(fù)方的抑菌作用最為明顯,MBC為0.1250g/ml:黃柏與白頭翁:黃柏(1:1)配伍提取液的抑菌效果一致,MBC為0.2500g/ml;白頭翁的抑菌效果不明顯,表現(xiàn)為耐藥。以上結(jié)果表明,復(fù)方的抑菌作用并不是各組成成分效果的簡單相加,復(fù)方中的黃柏具有顯著的抑菌作用,其與其它單劑顯著的協(xié)同作用使復(fù)方能有效的抑制或殺滅病原菌。試驗(yàn)二白頭翁、黃柏及其復(fù)方提取物對(duì)小

3、鼠腹瀉的防治作用試驗(yàn)選用50只體重為18-22g的ICR小鼠,隨機(jī)分成五組:空白對(duì)照組和給藥組(復(fù)方、黃柏、白頭翁以及白頭翁:黃柏(1:1)提取液組),每組10只,雌雄各半,預(yù)試期5d,正試期13d。每天按照4g生藥/kg體重劑量定時(shí)灌胃給予放置室溫的各藥物提取液,空白對(duì)照組給予等劑量的蒸餾水。第10d每只小鼠按0.2ml/10g體重劑量腹腔注射108個(gè)/ml大腸桿菌菌液,建立小鼠細(xì)菌性致腹瀉病理模型,觀察各提取液對(duì)小鼠的腹瀉次數(shù)、稀便

4、率的影響,第13d收集糞樣,變性梯度凝膠電泳研究腸道微生物區(qū)系的變化。結(jié)果顯示,造模當(dāng)天對(duì)照組的體重變化最為明顯,與其他各給藥組均差異顯著(P＜0.05),腹瀉最為嚴(yán)重;各提取液對(duì)大腸桿菌引起的腹瀉均有一定的抑制作用,其中復(fù)方的抑制效果最為明顯,與對(duì)照組相比腹瀉次數(shù)降低了51％(P＜0.05),而其他各給藥組之間差異不顯著(P＞0.05); DGGE圖譜分析顯示復(fù)方組的條帶數(shù)和多樣性指數(shù)均顯著多于其他處理組(P＜0.05),而其他各處理

5、組之間差異不顯著(P＞0.05), UPGMA相似性聚類分析則顯示各給藥組相似性系數(shù)都大于63%,且都?xì)w于一簇(除5號(hào)),而對(duì)照組的相似性系數(shù)在56%-69%之間,個(gè)體差異較大。以上結(jié)果表明,添加中草藥可以有效降低大腸桿菌引起的小鼠腹瀉,改善小鼠腸道微生物區(qū)系,使腸道微生態(tài)更加趨于優(yōu)化和平衡,從而保證腸道菌群的相對(duì)穩(wěn)定,其中以復(fù)方提取液的作用最為明顯。試驗(yàn)三白頭翁、黃柏及其復(fù)方提取物的安全性試驗(yàn)選用40只體重為18-22g的ICR小鼠,

6、隨機(jī)分為四組:空白對(duì)照組和給藥組(復(fù)方、黃柏以及白頭翁提取液組),每組10只,雌雄各半,適應(yīng)期5d,采用最大給藥量法進(jìn)行急性毒性試驗(yàn),連續(xù)觀察7d。結(jié)果顯示,各給藥組按0.4ml/10g體重最大給藥量6h內(nèi)兩次灌胃小鼠各提取液(相當(dāng)于136.8g生藥/kg體重),與對(duì)照組相比,體重、采食量、血液生化指標(biāo)和臟器系數(shù)均無顯著性差異(P＞0.05),對(duì)其內(nèi)臟器官進(jìn)行組織學(xué)檢查,也均無明顯病理變化。以上結(jié)果表明,各提取液對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠均安全無毒副作