低溫療法脫除馬鈴薯病毒及遺傳變異分析.pdf

1、植物病毒能影響植物的生長發(fā)育，降低作物的產(chǎn)量和質(zhì)量，對植物的危害十分嚴重。馬鈴薯退化是一種世界性病害，是由馬鈴薯病毒、微病毒、菌原質(zhì)及其它植物病毒侵染引起的。侵染源種類繁多，病毒是導(dǎo)致馬鈴薯退化的最重要原因之一，一般使馬鈴薯減產(chǎn)20％～50％，嚴重的達80％以上。傳統(tǒng)的植物病毒脫毒方法如莖尖培養(yǎng)和熱處理脫毒法對病毒的防治起到了重要的作用，然而由于技術(shù)操作困難、費時、脫毒率低等局限性，不能根治病毒的危害，致使病毒危害日益嚴重。近幾年發(fā)展起

2、來的低溫療法，不僅在保存植物種質(zhì)方面有獨特之處，而且操作簡單、快速、脫毒率高，是植物病毒脫除的一種新技術(shù)。 本實驗利用超低溫保存的方法，研究超低溫保存對馬鈴薯的病毒的脫除情況，同時通過對再生植株進行AFLP和MSAP技術(shù)分析，探討超低溫保存對材料的基因組序列和基因甲基化的影響，為低溫脫毒技術(shù)在馬鈴薯病毒脫除方面的應(yīng)用打下技術(shù)和理論基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下： 1、進一步優(yōu)化了馬鈴薯莖尖玻璃化法超低溫保存的程序，結(jié)果表明：4℃

3、低溫鍛煉7d，在MS培養(yǎng)基添加二甲基亞砜(DMSO)和乙酰胺的培養(yǎng)基中預(yù)培養(yǎng)5d，60％ PVS2室溫裝載30min，PVS20℃脫水40 min時，成活率最高，成活率可達71％左右。再生植株分化正常。 2、應(yīng)用擴增片段長度多態(tài)性(AFLP)技術(shù)對處理過的及對照組的基因組DNA進行分析。EcoR I和Mse I對基因組DNA進行雙酶切，6對引物組合共擴增出385條帶，超低溫保存前后的材料之間無差異帶，說明在超低溫保存處理過程中沒

4、有造成保存材料基因組DNA序列的變化。表明植株在DNA水平上保持較好的遺傳穩(wěn)定性。 3、運用甲基敏感擴增多態(tài)性( MSAP)標(biāo)記分析了處理樣品與對照組樣品間的甲基化水平情況。MSAP技術(shù)對超低溫保存前后植株的甲基化情況進行分析顯示：與對照相比，超低溫保存后的材料均產(chǎn)生了不同程度的甲基化變化。在擴增的624條帶中，對照和處理間完全一致的帶型為584條：有變化的帶型為40條，其中有13個位點發(fā)生了甲基化增加，21個位點發(fā)生了去甲基化