油菜黃化突變體葉綠體發(fā)育特性研究.pdf

1、該論文以油菜黃化突變體Cr3529為材料,研究了不同生長時期不同器官的基因表達、色素蛋白含量、葉綠素光譜吸收、LHCII的蛋白含量及組成、類囊體膜的室溫熒光光譜、CD譜、DCIP活性和多聚核糖體等.首先,分析了葉綠體重要外被膜轉運蛋白Toc33/Toc34的表達.通過蔗糖梯度和差速離心制備生長60天的油菜突變體及其野生型的葉綠體被膜,利用SDS變性膠分離葉綠體被膜蛋白,以擬南芥Toc33蛋白抗體免疫印跡分析Toc33/34蛋白含量的變化

2、,結果顯示:無論是在野生型還是突變體油菜被膜中僅能檢測到Toc33,并且在二者中的表達差異并不明顯,僅在突變體中有很少的增加.以我們自己克隆得到的油菜Toc33基因為探針,檢測了突變體及野生型油菜下胚軸和子葉中Toc33 mRNA水平上的差異.第二,分析了突變體與野生型油菜生長30天的幼苗不同器官全蛋白和葉綠素的含量,結果顯示:(1)突變體幼苗中全蛋白與葉綠素含量都減少,360-720nm光譜吸收也顯示突變體中吸收峰值降低,以相同鮮重上

3、樣SDS-PAGE分析結果與蛋白定量分析一致,相同鮮重突變體全蛋白含量較低:(2)突變體油菜具有較高的chla/chlb比值,但在不同器官存在差異:子葉中增加30﹪,下胚軸中增加20﹪;(3)相同鮮重上樣,突變體全蛋白中LHCII含量在子葉和下胚軸都降低,但以相同蛋白計,突變體下胚軸中LHCII含量明顯高于其在野生型中的含量;(4)林可霉素處理3-6小時導致chl含量在野生型油菜子葉中降低,突變體子葉中相反,chla和chlb也呈現(xiàn)出相

4、同的變化趨勢,chla/chlb在突變體中增加,在野生型中先(3h)升高又降至(6h)低于未用林可霉素處理的水平.我們推測突變體中chla向chlb的轉化效率降低,導致chlb的含量下降,進而導致chlb結合蛋白迅速降解而使積累水平降低.第三,借助于葉綠素光譜吸收、室溫熒光光譜、SDS-PAGE、LHCII的Western印跡、CD譜和DCIP活性測定等方法,對突變體與野生型油菜不同生長時期幼苗類囊體膜進行了分析.第四,突變體與野生型油