稻瘟菌REMI突變體庫的構(gòu)建和突變體篩選.pdf

1、本研究利用限制性內(nèi)切酶介導的整合技術(shù)構(gòu)建了含有10334個轉(zhuǎn)化體的稻瘟菌插入突變體庫。其中用XhoI線性化質(zhì)粒PV2轉(zhuǎn)化小種Y34獲得2200個轉(zhuǎn)化體，用XhoI、ApaI、EcoRV分別線性化質(zhì)粒PV2轉(zhuǎn)化小種P131，分別獲得2659、2517、228個轉(zhuǎn)化體，用EcoRI線性化質(zhì)粒pCB1004轉(zhuǎn)化小種P131，獲得2750個轉(zhuǎn)化體。轉(zhuǎn)化過程中發(fā)現(xiàn)用XhoI、ApaI、EcoRI轉(zhuǎn)化效率差別不大，平均每皿可獲得35-50個轉(zhuǎn)化體，

2、而EcoRV酶切形成的是平末端，平均每皿獲得7個轉(zhuǎn)化體，轉(zhuǎn)化效率很低。構(gòu)建好突變體庫后，作者通過洋蔥表皮接種和水稻葉片活體接種的方法篩選突變體。篩選約7000個轉(zhuǎn)化體后，獲得18個突變體。其中突變體Mo938的產(chǎn)孢量減少，平均每皿產(chǎn)孢量是P131的5％左右，突變體Mo1745的分生孢子形狀不規(guī)則，侵染釘減少。突變體Mo2424、EI2445在洋蔥表皮上侵染釘形成率分別小于20％和1％。分別將這四個突變體接種水稻品種麗江黑谷葉片后，發(fā)現(xiàn)M

3、o1745、EI2445在葉片上不產(chǎn)生病斑，接有Mo2424的葉片上的病斑數(shù)比接有P131的葉片上的病斑數(shù)減少86.9％。分別對Mo938、Mo1745、Mo2424和EI2445進行了共分離分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Mo1745、Mo2424和EI2445為插入突變體，而Mo938的突變表型不是由于REMI轉(zhuǎn)化過程中外源質(zhì)粒的插入引起的。進一步通過Southernblot分析質(zhì)粒在Mo1745的基因組中是單位點插入，但至少有兩個拷貝，在Mo242