稻瘟菌插入突變體庫的構(gòu)建及生長緩慢突變體的篩選.pdf

1、絲狀真菌稻瘟菌(Magnaporthe grisea)可以引起水稻病害，而且是研究病原真菌的模式菌。獲得與稻瘟菌中菌絲生長相關(guān)的基因為稻瘟菌的功能基因組研究提供了材料，為在分子生物學(xué)和分子遺傳學(xué)上闡述稻瘟菌致病機(jī)理有著重要的意義。為此，作者開展了本研究。
　　 一定規(guī)模的稻瘟菌插入突變體庫可以為本研究提供必要的研究材料。作者利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化(ATMT)方法構(gòu)建了包含5090個P131轉(zhuǎn)化子，4310個guy11轉(zhuǎn)化子

2、的稻瘟菌插入突變體庫，并且使轉(zhuǎn)化效率到達(dá)了約700～1200個轉(zhuǎn)化子/106個孢子。
　　 作者篩選野生型稻瘟菌P131的ATMT插入突變體庫獲得了17個表型為生長緩慢型P131的突變體。通過有性雜交證明10個突變體的突變表型與插入標(biāo)記是共分離的。進(jìn)一步測定其中部分突變體產(chǎn)孢量低于野生型稻瘟菌P131，部分突變體侵染釘、附著胞、侵染菌絲形成率降低，部分突變體對水稻麗江黑谷的致病力有不同程度的下降，但是十個突變體都沒有致病性方面的

3、差異。
　　 隨后，作者通過質(zhì)粒拯救和TAIL-PCR方法獲得了突變體mvc5、mvc7、mvc8的側(cè)翼序列，BLAST分析表明在mvc5、mvc7、mvc8中插入位點可能分別落在了基因MGG02843.5、MGG05629.5、MGG12252.5的編碼區(qū)上，編碼產(chǎn)物分別為一個核酸外切酶的小囊泡復(fù)合體、一個錨定蛋白重復(fù)序列介導(dǎo)的蛋白和一個動力蛋白GTPase。另外作者正在進(jìn)行其他突變體側(cè)翼序列拯救，這些都為克隆該類基因奠定了基