精核解聚影響豬卵胞質(zhì)內(nèi)單精子注射（ICSI）效果研究.pdf

1、西南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文精核解聚影響豬卵胞質(zhì)內(nèi)單精子注射（ICSI）效果研究姓名：肖雄申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：李躍民20050501西南農(nóng)業(yè)太學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要假性注射組(59％VS453％，516％)和對(duì)照組(45％VS388％，465％)中，Cacl2處理組的孤雌發(fā)育率極顯著地低于離子霉素和電激活處理組(PO01)；(3)CaCl。處理后ICSI卵母細(xì)胞發(fā)育情況：CaClz處理組的卵裂率(48，1％VS170

2、％)(PO01)囊胚總細(xì)胞數(shù)(302VS263)(PO05)顯著高于未經(jīng)caClz活化的對(duì)照組。結(jié)果表明ICSI卵母細(xì)胞經(jīng)CaCl。溶液激活處理后，能夠取得較好的。ICSI效果，而不顯著增加其孤雌發(fā)育率。故在后面的實(shí)驗(yàn)中采用該種方法進(jìn)行注射卵的激活。：)試驗(yàn)3：不同濃度DTT預(yù)處理精子對(duì)精子形態(tài)、精核解聚和ICSI效果影響的研究。(1)精子形態(tài)：精子分別與2mM、4mM：6mM和8mbID玎共孵育1h后，觀察精子形態(tài)學(xué)變化結(jié)果發(fā)現(xiàn)精子頭

3、部膨大并彎曲，甚至彎曲靠近赤道板，精子尾的中部膨脹并彎曲隨著DTT濃度的增加，精子形態(tài)學(xué)的改變更為明顯。在未經(jīng)DTT處理的精子中沒有笈現(xiàn)類似的改變。(2)精核解聚：精子在添加有或無DTT的mTBM液中進(jìn)_步孵育，6h內(nèi)每隔2h取樣，通過熒光染色，發(fā)現(xiàn)精核發(fā)生了具有時(shí)間依賴性的漸進(jìn)性去凝聚，在未經(jīng)DTT處理的精子中仍然未觀察到類似的去凝聚現(xiàn)象。表明DTT能夠?qū)ωi精核起到較好的解聚效果。(3)ICSI效果：采用不同處理濃度的DTT預(yù)處理精子

4、，經(jīng)ICSI后18h，精核去凝聚率隨DTT濃度的增加而提高，而6mMD丌精子預(yù)處理組2PN2Pb形成率(606％versus489％，527％，512％，467％：PO01)和卵裂率“91％VS432％，438％，405％，443％；P(O05)均高于其它處理組和對(duì)照組。就胚胎后期發(fā)育而言，各試驗(yàn)組的囊胚發(fā)育率無明顯差異，且隨著DTT濃度的增加，囊胚總細(xì)胞數(shù)呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，6mM處理組的囊胚細(xì)胞數(shù)高于8mM處理組(262VS230)(P0

5、01)，但也極顯著地低于對(duì)照組(262VS298)(PO01)。結(jié)果表明6mMDTT預(yù)處理精于的ICSI效果要好于其它處理組，m在促進(jìn)精核解聚的同時(shí)所產(chǎn)生的副作用在一定程度上影響了ICSI胚胎的后期發(fā)育。實(shí)驗(yàn)4：GSH對(duì)豬精子ICSI效果的影響。采用不同濃度即025$4、050mM、1OmM的GSH預(yù)處理精子后進(jìn)行ICSI，檢測(cè)GSfl精核預(yù)處理對(duì)精核解聚、雄原核形成及胚胎發(fā)育率和胚胎質(zhì)量的影響。結(jié)果顯示，隨著GSH濃度的升高，注射卵母

6、細(xì)胞的2P婀2Pb形成率、MPN形成率和精核解聚率都呈上升趨勢(shì)。05棚。GSH處理組的卵裂率高于025mM、1tOmMGSH處理組(563％VS511％，516％；PO∞)和對(duì)照組(563％；VS449％，PO叭)，囊胚發(fā)育率顯著高于對(duì)照組(73％VS28％)(PO05)。三個(gè)處理組之間的囊胚發(fā)育率無顯著性差異。說明050mM。GSH處理組的ICSI效果要優(yōu)于其它濃度處理組。比較6mMDTT和05mMGSH預(yù)處理精子后的ICSI效果發(fā)現(xiàn)