木豆的離體培養(yǎng)及遺傳變異的分子檢測.pdf

1、本文以桂木1號木豆（Cajanus cajan L.）為材料，對其離體快繁、適宜于遺傳工程的再生體系、以及離體材料的遺傳穩(wěn)定性等方面進(jìn)行了探討，以期為資源的離體快繁、離體保存和遺傳轉(zhuǎn)化等提供了技術(shù)平臺。取得以下結(jié)果：
　　1、離體再生體系的建立與優(yōu)化
　　無菌系的建立，用75％酒精浸泡30s后，分別用0.1％升汞溶液和10％NaClO3溶液采用不同時(shí)間進(jìn)行滅菌。隨后接種在MS+BA（0.5mg/L）+IBA（0.1mg/L）

2、+蔗糖（3.0％）+瓊脂（0.7％）培養(yǎng)基上，得出最佳處理方式為10％NaClO3溶液滅菌15min其污染率8％，萌發(fā)率84.7％。外植體類型、年齡、培養(yǎng)基中生長調(diào)節(jié)物質(zhì)（PGR）種類及含量等因子對木豆離體再生有很大影響。選用萌發(fā)后種子的子葉節(jié)接種于EC6+BA（4.0mg/L）+IBA（0.1mg/L）+蔗糖（3.0％）+瓊脂（0.7％）的培養(yǎng)基中，獲得了較高的不定芽再生頻率為91.7％。不定芽增殖培養(yǎng)最佳培養(yǎng)基為EC6+BA（4.5

3、mg/L）+IBA（0.1mg/L）+KT（0.4mg/L）+AdS（90mg/L）+蔗糖（3.0％）+瓊脂（0.7％），增殖系數(shù)達(dá)到（4.6）。生根培養(yǎng)以1/2MS+IBA（0.2mg/L）+蔗糖（2.0％）+瓊脂（0.7％）培養(yǎng)基上效果最佳。煉苗約15d后移栽，移栽成活率82.5％。
　　2、愈傷組織培養(yǎng)
　　外植體類型、基本培養(yǎng)基、生長素種類及濃度對木豆愈傷組織的誘導(dǎo)有一定影響。以子葉節(jié)接種在B5+BA（1.0mg/L

4、）+KT（1.0mg/L）+蔗糖（3.0％）+瓊脂（0.7％）的培養(yǎng)基中誘導(dǎo)愈傷組織效果較好，出愈率為52.7％。
　　3、離體材料的常溫保存
　　把木豆試管苗接種在1/4MS+蔗糖（1.5％）+瓊脂粉（0.7％）培養(yǎng)基中添加3.0mg/L脫落酸（ABA）進(jìn)行常溫保存效果最好，苗生長高度為3.3cm，芽苗生長緩慢,較健壯，葉綠，約50d繼代一次。
　　4、離體材料遺傳變異的分子檢測
　　采用60個(gè)引物對木豆田間材