葛銀口服液抗肉鴿熱應(yīng)激作用機(jī)制初探及葛根素代謝動(dòng)力學(xué)測(cè)定.pdf_第1頁(yè)
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1、本研究以肉鴿為試驗(yàn)動(dòng)物建立了具有實(shí)踐指導(dǎo)意義的熱應(yīng)激模型.在此基礎(chǔ)上,研究中藥葛銀口服液對(duì)熱應(yīng)激肉鴿的保護(hù)機(jī)理及其血漿藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)。試驗(yàn)包括研究葛銀口服液對(duì)血液酶指標(biāo)和熱休克蛋白70 mRNA表達(dá)量的影響;比較分析了單味葛根和葛銀口服液中葛根素在鴿子體內(nèi)的血漿藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)。
   葛銀口服液對(duì)熱應(yīng)激肉鴿血液酶活性的影響中藥可以緩解熱應(yīng)激的不良影響,改善血液生化水平。本試驗(yàn)研究了葛銀口服液對(duì)熱應(yīng)激肉鴿血清中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT

2、)、堿性磷酸酶(ALP)、肌酸肌酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)的影響。結(jié)果表明,高溫應(yīng)激后,模型組肉鴿的ALT、CK和LDH高于常溫對(duì)照組,但是高溫用藥組的含量要低于模型組。高溫模型組中ALP比常溫對(duì)照組要低,高溫用藥組含量比模型組要略高些,但對(duì)其影響不大,說(shuō)明葛銀口服液對(duì)熱應(yīng)激肉鴿ALP的調(diào)節(jié)作用不明顯.
   葛銀口服液對(duì)熱應(yīng)激肉鴿HSP70 mRNA表達(dá)量的影響熱休克蛋白是一種可使細(xì)胞非特異性損傷能力得到增強(qiáng)的保護(hù)性蛋白

3、。本試驗(yàn)研究了葛銀口服液對(duì)熱應(yīng)激肉鴿熱休克蛋白70mRNA表達(dá)量的影響。首先,從組織中提取總RNA,將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序、比對(duì),測(cè)得的rg-576hsp70基因序列與日本鵪鶉HSP70(AB262971.1)序列比對(duì),同源性為92%;與珍珠雞HSP70序列(AB096696.1)具有93%的同源性,證明RT-PCR產(chǎn)物的電泳條帶就是我們尋找的目的片段。在此基礎(chǔ)上,利用熒光定量PCR檢測(cè)肉鴿心臟和肝臟中HSP70 mRNA表達(dá)量。結(jié)果表明,

4、高溫用藥組肉鴿心臟、肝臟中的HSP70 mRNA含量顯著高于高溫模型組,表明中藥復(fù)方可以誘導(dǎo)肉鴿組織中HSP70mRNA表達(dá)量的增加,從而增強(qiáng)了肉鴿對(duì)高溫的耐受性。
   葛根素在肉鴿體內(nèi)的代謝動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)建立HPLC法測(cè)定單味葛根煎劑和葛銀口服液中葛根素在肉鴿體內(nèi)的24小時(shí)血藥濃度,通過(guò)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)變化來(lái)評(píng)價(jià)藥效的作用。色譜條件流動(dòng)相為甲醇-0.1%醋酸水(27:73),流速1.0 ml·min-1,檢測(cè)波長(zhǎng)250nm,柱溫為25

5、℃,并用3P87程序擬合藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)單味葛根和葛銀口服液灌胃15min后即可檢出血漿中的葛根素,最高血藥濃度出現(xiàn)在1.5-4小時(shí).試驗(yàn)結(jié)果表明,葛根素代謝在肉鴿體內(nèi)符合二室開(kāi)放模型分布,單味葛根和葛銀口服液中的葛根素在肉鴿體內(nèi)都呈現(xiàn)吸收快、消除慢的特點(diǎn);相比之下,葛銀口服液中的葛根素藥物分布半衰期t1/2α變長(zhǎng),消除半衰期t1/2β變短,最高血藥濃度的時(shí)間tmax提前,最高血藥濃度cmax變大,表明了葛銀口服液中的葛根素在肉鴿體

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