橄欖葉黃酮合成相關(guān)基因cDNA的克隆.pdf

1、本研究以‘長營’橄欖葉片為材料，采用RT-PCR和RACE技術(shù)，克隆出C4H基因的全長以及PAL和4CL基因的片段。為進一步從分子角度探討這些基因與黃酮合成的關(guān)系，揭示黃酮合成的分子機理，為今后橄欖葉黃酮類化合物的開發(fā)利用奠定理論依據(jù)。研究結(jié)果如下： 1采用RT-PCR和RACE技術(shù)克隆了橄欖葉片C4H基因全長 橄欖葉片C4H基因cDNA全長為1819 bp，其中包含一個完整開放閱讀框為1518 bp，編碼505個氨基酸

2、，分子量57.837 kD，等電點9.72；5′非編碼區(qū)為63 bp，3′非編碼區(qū)為238 bp。將橄欖葉片C4H全長用BLAST軟件比對，結(jié)果表明，該序列與楊樹C4H基因家族、柑橘、木棉、樹莓、茶同源性比較高，分別為82％、82％、81％、80％、81％；并對其氨基酸序列進行比對發(fā)現(xiàn)，橄欖葉片的C4H蛋白與楊樹相似性最高為93％，其次是柑橘和木棉，為92.7％，而與擬南芥的相似性最低，僅有81％。該基因在GenBank中登錄號為FJ8

3、21504。經(jīng)保守區(qū)功能區(qū)的分析，推導(dǎo)出C4H蛋白擁有一個完整的P450保守區(qū)，推測C4H蛋白是一種細胞色素蛋白。 2采用RT-PCR和RACE技術(shù)克隆了橄欖葉片PAL基因cDNA片段 從橄欖葉片中克隆得到的PAL基因片段長2172 bp，已經(jīng)在GenBank上登錄，登錄號為FJ821505。經(jīng)BLAST軟件分析表明，PAL基因的編碼產(chǎn)物與許多植物的PAL蛋白具有很高的同源性；并對保守功能區(qū)進行了分析，推導(dǎo)出PAL片段含

4、有三個相似的結(jié)構(gòu)功能區(qū)域，即PAL-HAL、Lyase_I_like家族和PAL，這三個區(qū)域都具有脫氫丙氨?；挠H電中心部位，這些相似結(jié)構(gòu)區(qū)域可能與它的性質(zhì)和功能密切聯(lián)系。 3采用RT-PCR和RACE技術(shù)克隆了橄欖葉片4CL基因cDNA片段 在橄欖葉片中克隆得到的4CL基因片段長為360 bp，經(jīng)BLAST軟件分析表明，該片段與許多植物的4CL基因具有很高的同源性；經(jīng)在線的BLAST軟件分析，該序列與楊樹、枇杷、煙草、