流蘇、金釵、報(bào)春石斛種子非共生萌發(fā)以及流蘇石斛離體保存的研究.pdf

1、流蘇石斛(Dendrobium fimbriatum Hook．)、金釵石斛(D．nobile Lindl．)和報(bào)春石斛(D．primulinum Lindl．)屬于蘭科(Orchidaceae)石斛屬(Dendrobium)，具有重要的觀賞價(jià)值和藥用價(jià)值。由于其自身生物學(xué)特性及人為破壞等因素，野生石斛資源瀕臨滅絕。本文通過(guò)對(duì)流蘇石斛繁育系統(tǒng)的初探以及流蘇石斛、金釵石斛和報(bào)春石斛種子非共生萌發(fā)的系統(tǒng)研究，為野生石斛的工廠化育苗提供了參考

2、數(shù)據(jù)；同時(shí)在組織培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，結(jié)合離體保存技術(shù)對(duì)野生石斛種質(zhì)資源保存可行性進(jìn)行了研究，以期找到野生石斛種質(zhì)資源最佳的中長(zhǎng)期保存方法，對(duì)保護(hù)生物多樣性的保護(hù)具有積極意義。 本試驗(yàn)通過(guò)不同授粉方式，對(duì)流蘇石斛繁育系統(tǒng)進(jìn)行了研究，結(jié)果表明：流蘇石斛既不存在無(wú)融合生殖也不存在自動(dòng)自花授粉現(xiàn)象，它必須借助一定的傳粉媒介來(lái)實(shí)現(xiàn)繁殖成功。流蘇石斛自交部分不親合，其自交結(jié)實(shí)率較低，僅為11.11％；異交結(jié)實(shí)率為76.47％，明顯高于自交結(jié)實(shí)率。

3、 對(duì)3種野生石斛種子非共生萌發(fā)試驗(yàn)結(jié)果表明：培養(yǎng)溫度20～30℃時(shí)，3種石斛種子均可萌發(fā)，但25℃下表現(xiàn)最佳，其種子萌發(fā)整齊，圓球莖粒大呈鮮綠色。培養(yǎng)條件為KnudsonC(KC)+2mg/L6—BA+0.2mg/L NAA時(shí)最利于流蘇和金釵石斛原球莖誘導(dǎo)和幼苗分化，圓球莖誘導(dǎo)率分別為96.1％和97.3％，幼苗分化率分別為95.2％和95.7％；KC+0.5 mg/L NAA時(shí)最適報(bào)春石斛原球莖誘導(dǎo)和幼苗分化，誘導(dǎo)率和分化率分

4、別為90.3％和81.3％。培養(yǎng)基中添加1mg/LAC對(duì)3種石斛種子萌發(fā)影響不明顯，種子前期萌發(fā)整齊，生長(zhǎng)勢(shì)好，但在圓球莖培養(yǎng)18～36d內(nèi)出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。 對(duì)流蘇石斛離體保存的研究，分為幼苗低溫限制生長(zhǎng)離體保存和圓球莖超低溫保存兩部分。 幼苗低溫限制生長(zhǎng)離體保存：在15℃下，流蘇石斛試管幼苗生長(zhǎng)受到抑制，KC培養(yǎng)基+3％mannitol，10個(gè)月后存活率可達(dá)96％。存活的幼苗接種于增殖培養(yǎng)基中，仍能正常生長(zhǎng)、增殖和生根。

5、同時(shí)，KC培養(yǎng)基+1％mannitol，KC培養(yǎng)基+5％mannitol以及對(duì)照，試管幼苗10個(gè)月后存活率分別為68％，40％和28％；KC培養(yǎng)基+10～50mg/L B9，試管苗保存4個(gè)月后全數(shù)死亡；添加0.5mg/L NAA+1g/LAC的KC培養(yǎng)基中保存10個(gè)月后存活率為82％，效果較好；0.1mg/L NAA+1g/L AC和1.0mg/L NAA+1g/L AC組合存活率分別為72％，40％。 圓球莖超低溫保存：液體K

6、C培養(yǎng)基+10mg/L ABA，預(yù)處理10d后的流蘇石斛原球莖，脫水速率低于對(duì)照，脫水10h后含水量由初始10.1329g H2O g-1 DW降至0.2215g H2O g-1DW；對(duì)照含水量由初始11.0050g H2O g-1 DW降至0.1735g H2O g-1 DW。脫水10h后的存活率為62％，對(duì)照為57％。證明ABA預(yù)培養(yǎng)使原球莖獲得了更高的脫水耐性。脫水耐性是由一系列的損傷和保護(hù)機(jī)制相互協(xié)調(diào)的復(fù)雜生理現(xiàn)象。脂質(zhì)過(guò)氧化反

7、應(yīng)和活性氧壓造成損傷的重要原因。在脫水過(guò)程中，ABA處理及對(duì)照組合的流蘇石斛原球莖內(nèi)CAT活性呈上升趨勢(shì)；APX活性呈下降趨勢(shì)；SOD活性則是先下降，在脫水6h時(shí)大幅上升后再下降；APX和SOD活性的降低在一定程度上被CAT活性的增加所補(bǔ)償。脫水6h時(shí)，ABA處理的原球莖含水量為0.6250g H2O g-1 DW，超低溫保存后，存活率和恢復(fù)率分別為74％和72％；對(duì)照原球莖含水量為0.4837g H2O g-1 DW，凍后的存活率和恢