金釵石斛多糖對K562細胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的：研究金釵石斛多糖對慢性粒細胞白血病K562細胞增殖和凋亡的影響及其可能的機制，為金釵石斛多糖藥理作用的進一步研究提供實驗依據(jù)。 方法：1．采用正交實驗對多糖含量測定條件和多糖提取工藝進行優(yōu)化。2．水提醇沉法提取金釵石斛多糖；紅外光譜分析該多糖的特征性吸收峰；紫外分光光度法對多糖純度進行判定；苯酚-硫酸法進行多糖含量測定。3．體外培養(yǎng)人白血病K562細胞，不同濃度金釵石斛多糖（100mg/L，200mg/L，400mg/L，

2、800mg/L）直接作用于K562細胞24h，48h和72h：①MTT比色法觀察細胞增殖情況：②Annexin V-FITC/PI雙染細胞，利用流式細胞儀觀察K562細胞早期凋亡率：利用激光共聚焦顯微鏡觀察K562細胞凋亡形態(tài)；③real-time PCR檢測K562細胞中BCR-ABL融合基因的表達情況。 結果：①優(yōu)化了多糖含量測定條件和多糖提取條件。在最佳條件下，反應迅速完全，且生成的有色化合物在90min內(nèi)穩(wěn)定：②提取出的

3、金釵石斛多糖經(jīng)理化性質(zhì)分析，表現(xiàn)出多糖的特征，紅外光譜分析可見多糖的特征性吸收峰，紫外光譜在200nm處有最大吸收峰，苯酚-硫酸法測得金釵石斛多糖相對含量為80．2％③MTT和Annexin V-FITC/PI雙染結果顯示，金釵石斛多糖可抑制K562細胞增殖并誘導其凋亡，且隨劑量和時間的增加效果增強。④real-time PCR結果顯示金釵石斛多糖可使BCR-ABL融合基因表達量下降，且隨多糖濃度增加和作用時間延長mRNA表達量下降明顯