中國(guó)四個(gè)家驢品種遺傳多樣性及分子及系統(tǒng)進(jìn)化研究.pdf

1、本研究從山東省濱州市無(wú)棣縣、甘肅省張掖市高臺(tái)縣、內(nèi)蒙古自治區(qū)赤峰市、云南省大理白族自治州和玉溪市澄江縣等地區(qū)采集了德州驢（DZ，75只）、涼州驢(LZ，49只)、華北驢（MG，30只）、西南驢(YN，55只)四個(gè)中國(guó)家驢品種的樣本。
　　 參考NCBI上公布的家驢的線粒體基因組序列，自行設(shè)計(jì)十對(duì)引物進(jìn)行擴(kuò)增，基于PCR-SSCP和DNA測(cè)序技術(shù)，檢測(cè)了線粒體DNA編碼區(qū)NADH脫氫酶第4亞基（ND4三個(gè)位點(diǎn)、ND4L一個(gè)位點(diǎn)、第

2、5亞基（ND5）一個(gè)位點(diǎn)和第六亞基（ND6一個(gè)位點(diǎn)以及細(xì)胞色素b基因（Cytb）幾乎全部序列（分為四個(gè)位點(diǎn)）。通過(guò)單鏈構(gòu)象多態(tài)(SSCP)技術(shù)檢測(cè)了上述位點(diǎn)的多態(tài)性，并對(duì)各位點(diǎn)的純合子進(jìn)行了克隆與測(cè)序。
　　 在檢測(cè)的十個(gè)位點(diǎn)中，有七個(gè)位點(diǎn)存在多態(tài)現(xiàn)象。對(duì)四個(gè)家驢品種的所有樣本的七個(gè)位點(diǎn)都用Dnasp4.50.3進(jìn)行了遺傳多樣性的分析。通過(guò)對(duì)NADH脫氫酶基因的三個(gè)位點(diǎn)按照ND4上游→ND4下游→ND5的順序依次進(jìn)行拼接，對(duì)這一

3、拼接合并后的序列通過(guò)MEGA4.0進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系研究，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，發(fā)現(xiàn)四個(gè)品種家驢群體可分為A和B兩個(gè)母系起源。與以前的研究結(jié)果相似，本研究也發(fā)現(xiàn)所研究的中國(guó)家驢品種由兩個(gè)世系構(gòu)成，而且地理分布區(qū)域、母系起源與品種之間沒(méi)有任何關(guān)系。經(jīng)過(guò)Network4.5.0.2對(duì)拼接合并后的序列進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)聚類(lèi)分析，進(jìn)一步證明了這一結(jié)果。通過(guò)對(duì)NADH基因拼接序列進(jìn)行Tajima中性檢驗(yàn)證明:研究的四個(gè)家驢品種的A、B兩個(gè)世系都沒(méi)有經(jīng)歷過(guò)群體擴(kuò)張。