楔葉鐵線蕨低溫逆境生理性質(zhì)的研究與組培快繁體系建立.pdf

1、楔葉鐵線蕨(A．raddianum)屬鐵線蕨科(A.diantaceae)鐵線蕨屬(Adiantum L．)植物，多年生小型常綠草本，植株矮小，非常適合室內(nèi)盆栽或制作盆景，近些年來越來越受到人們的喜愛和青睞。 本試驗(yàn)以楔葉鐵線蕨為試材，一方面研究低溫脅迫下楔葉鐵線蕨的基礎(chǔ)代謝，探討其生理生化指標(biāo)與抗冷性的關(guān)系，并使用酚類化合物水楊酸(SA)提高其在逆境條件下的抗性；另一方面研究以孢子為外植體的組織培養(yǎng)，篩選出孢子萌發(fā)、原葉體增殖

2、和孢子體誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)條件，建立完整的楔葉鐵線蕨快繁體系，從而為楔葉鐵線蕨在北方的擴(kuò)大繁殖及觀賞價值的提高提供理論依據(jù)和資料積累。 (一)楔葉鐵線蕨低溫逆境生理性質(zhì)研究部分的方法和結(jié)果如下： 1．選取長勢旺盛的楔葉鐵線蕨盆栽置于4±0.5℃下低溫脅迫，在第0.5、1、1.5、2、3、4、5、6天采摘新鮮葉片；再用0.5、1.0、2.0、4.0 mmol/L四個梯度濃度的水楊酸(SA)水溶液進(jìn)行噴葉與灌根相結(jié)合的方法處理后

3、置于4±0.5℃下低溫脅迫，在第3天和第6天采摘新鮮葉片。 2．楔葉鐵線蕨本身可對冷害作出“適應(yīng)性”反應(yīng)，低溫脅迫下植株脯氨酸含量增加，可溶性糖含量增加，保護(hù)酶SOD活性提高，細(xì)胞膜透性增大后有所降低，MDA含量上升又略有下降，內(nèi)源激素ABA含量上升。這些變化只是在脅迫初期的48小時內(nèi)，隨著脅迫時間的延長，脯氨酸含量降低，可溶性糖含量降低，保護(hù)酶SOD活性下降，細(xì)胞膜透性繼續(xù)增大，MDA含量再次上升，內(nèi)源激素ABA含量降低。

4、 3．水楊酸能降低細(xì)胞電解質(zhì)外滲率，減輕膜脂過氧化作用，保護(hù)SOD和其它蛋白質(zhì)，保持膜結(jié)構(gòu)和功能的完整性等等，從而緩解逆境脅迫的造成的傷害，增強(qiáng)對低溫的抗性。以2mmol/L濃度的水楊酸處理為提高楔葉鐵線蕨抗冷性的最適濃度。 (二)楔葉鐵線蕨組培快繁體系建立研究部分的方法和結(jié)果如下： 1．以楔葉鐵線蕨孢子為外植體，在孢子初代培養(yǎng)的探索階段設(shè)計不同基本培養(yǎng)基、添加活性炭和不同水平赤霉素的單因素試驗(yàn)；孢子初代培養(yǎng)的確定階

5、段設(shè)計3因素3水平的正交實(shí)驗(yàn)；原葉體增殖培養(yǎng)階段也是設(shè)計3因素3水平的正交實(shí)驗(yàn)；孢子體誘導(dǎo)階段安排完全組織培養(yǎng)和不完全組織培養(yǎng)兩種方式；最后是移栽。 2．以孢子為外植體途徑主要是對孢子萌發(fā)和孢子體誘導(dǎo)兩個步驟進(jìn)行研究。單因素的試驗(yàn)設(shè)計結(jié)果是：無機(jī)鹽含量較低的基本培養(yǎng)基適于孢子萌發(fā)，赤霉素和活性炭的使用都有促進(jìn)楔葉鐵線蕨孢子萌發(fā)的作用，經(jīng)正交實(shí)驗(yàn)得到的孢子萌發(fā)最適培養(yǎng)基是：1/2MS培養(yǎng)基+3.0mg/L GA+0.3％活性炭+3