短柄櫻桃需冷量及休眠解除相關差異表達基因研究.pdf

1、短柄櫻桃(Prunus.pseudocerasus Lindl.cv.Duanbing)是在浙江地區(qū)主栽的中國櫻桃(P.pseudocerasus)優(yōu)良品種。通過溫度依賴性機制來控制芽的萌發(fā)是多年生木本植物重要生態(tài)特征。如果能調(diào)控芽的萌發(fā)，對水果和園藝產(chǎn)業(yè)來說具有重要的經(jīng)濟意義，因而是否能準確預測休眠的解除成為目前利用溫室擴大栽培的關鍵，而且，受全球氣溫升高的影響，這對田間生產(chǎn)來說也日漸重要。因此，對短柄櫻桃花芽休眠進行研究不論是在休眠

2、機制的認識還是在標準化生產(chǎn)應用方面都是非常必要的。本研究以中華櫻桃浙江地區(qū)的代表品種短柄櫻桃為實驗材料，在自然休眠期內(nèi)，研究了短柄櫻桃花芽休眠相關的以下幾個問題：$ 1.2007年和2008年，連續(xù)兩年對短柄櫻桃花芽需冷量及金華地區(qū)冬季低溫積累量進行了統(tǒng)計研究。結(jié)果顯示：基本確定短柄櫻桃花芽休眠結(jié)束期在12月的下旬。在水培統(tǒng)計萌芽率確定休眠進程的基礎上，用0～7.2℃、≤7.2℃模型和猶他模型統(tǒng)計了需冷量。通過年際間的比較，猶他

3、模型的統(tǒng)計結(jié)果比較穩(wěn)定，估計短柄櫻桃需冷量在300 C.U左右；統(tǒng)計結(jié)果同時顯示金華地區(qū)冬季(11月到次年1月)的冷溫積累量可以達到800 C.U左右，這也為浙江地區(qū)其他櫻桃品種的引進提供了參考依據(jù)。 2.對2007年自然休眠期的短柄櫻桃花芽的內(nèi)源激素(ABA和GA3)、水分、總酚及營養(yǎng)物質(zhì)(可溶性糖、淀粉、游離氨基酸、可溶性蛋白質(zhì))含量及代謝變化進行了研究。結(jié)果顯示：與休眠階段相比，在休眠解除階段花芽含水量及蛋白質(zhì)含量增加，糖

4、類含量減少，說明休眠解除代謝的作用增強，為后期花芽的萌發(fā)奠定了基礎；總酚含量在自然休眠期間隨著休眠深入保持緩慢的增加，之后隨休眠的解除總酚的含量下降；內(nèi)源激素花芽ABA含量呈先升后降的趨勢，12月上旬達頂峰，GA3含量變化與其相反，休眠初期下降，休眠解除期間含量有所上升，與休眠進程關系明顯。 3.采用mRNA差異顯示技術，分析滿足低溫積累導致休眠解除的過程中相關差異表達基因。首先對短柄櫻桃花芽的總RNA提取方法進行探索，用四種不

5、同方法對提取效果進行了比較研究，得出CTAB法為提取短柄櫻桃花芽的最佳方法；mRNA差異顯示分析共成功克隆獲得79個差異cDNA片段；通過半定量RT-PCR驗證，確定18個陽性差異cDNA片段為休眠解除相關候選基因，其中隨休眠解除上調(diào)的基因片段11個，下調(diào)基因片段7個。通過測序及同源性比對，對這些差異基因片段的功能及在休眠解除過程中的作用進行了分析和討論。上調(diào)的基因與以下已知功能的基因在氨基酸編碼水平上有很大的相似性，包括核糖體蛋白、亮