暗黑鰓金龜幼蟲發(fā)酵腔可培養(yǎng)細(xì)菌多態(tài)性與超微結(jié)構(gòu)研究.pdf

1、暗黑鰓金龜（Holotrichia parallela）是我國(guó)重要的農(nóng)業(yè)害蟲，數(shù)量巨大，分布廣泛。其幼蟲與成蟲均可對(duì)作物造成嚴(yán)重的危害。本文對(duì)暗黑鰓金龜幼蟲后腸發(fā)酵腔可培養(yǎng)細(xì)菌多樣性和發(fā)酵腔超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究，為闡明發(fā)酵腔可培養(yǎng)菌的群落結(jié)構(gòu)組成及發(fā)酵腔的結(jié)構(gòu)與功能，微生物與寄主的協(xié)同進(jìn)化及共生微生物對(duì)寄主的作用提供理論基礎(chǔ)，最終為利用微生物防治此類害蟲提供新的思路。
　　 本研究首先通過微生物的培養(yǎng)、分離及PCR-DGGE分子技術(shù)

2、研究了暗黑鰓金龜3齡幼蟲發(fā)酵腔內(nèi)可培養(yǎng)菌的群落組成，然后利用切片及顯微技術(shù)詳細(xì)研究了不同發(fā)育階段發(fā)酵腔超微結(jié)構(gòu)的變異。主要研究結(jié)果如下：
　　 利用細(xì)菌平板計(jì)數(shù)得知發(fā)酵腔可培養(yǎng)細(xì)菌為33.4×107cfu/ml；而通過熒光染色計(jì)數(shù)可知發(fā)酵腔細(xì)菌總數(shù)為1.67x1010/ml，可見發(fā)酵腔內(nèi)大量細(xì)菌是不可培養(yǎng)的。
　　 從暗黑鰓金龜幼蟲后腸發(fā)酵腔中分離到38種不同遺傳型細(xì)菌，分屬于腸桿菌科的腸桿菌屬（Enterobacter

3、）、Grimontella屬、檸檬酸桿菌屬（Citrobacter）、沙門氏菌屬（Salmonella）、克雷伯氏菌屬（Klebsiella）、奈瑟氏菌科（Neisseriaceae）不動(dòng)桿菌屬（Acinetobacter）、巴斯德菌科（Pasteurellaceae）的嗜血桿菌屬（Haemophillus）、伯克氏菌科（Burkholderiaceae）的纖發(fā)菌屬（Leptothrix）、梭菌科（Clostridiaceae）的梭狀芽

4、胞桿菌屬（Clostridium）和CFB菌群（Cytophaga-flexibacter-bacteroides group）。
　　 其中腔壁好氧菌11種不同遺傳型，分屬于腸桿菌科的4個(gè)屬：腸桿菌屬、Grimontella屬、檸檬酸桿菌屬和沙門氏菌屬。從各屬的分布情況來看，有7種不同遺傳型細(xì)菌屬于腸桿菌屬，細(xì)菌數(shù)量占發(fā)酵腔腔壁好氧菌的84.62％，為優(yōu)勢(shì)菌群；有2種不同遺傳型細(xì)菌屬于Grimontella屬，占12.31％；

5、1種屬于檸檬酸桿菌屬，占3.08％；1種屬于沙門氏菌屬，占1.54％。
　　 腔液好氧菌11種，分屬于腸桿菌科的克雷伯氏菌屬、腸桿菌屬和沙門氏菌屬以及奈瑟氏菌科的不動(dòng)桿菌屬。從各屬的分布比例來看，有5種不同遺傳型細(xì)菌屬于克雷伯氏菌屬，占20.26％；有4種不同遺傳型細(xì)菌屬于腸桿菌屬，占75.82％，為主要優(yōu)勢(shì)菌；1種屬于沙門氏菌屬，占1.96％；1種屬于不動(dòng)桿菌屬，占1.96％。
　　 腔壁厭氧菌8種，分屬于腸桿菌科的醋

6、酸桿菌屬、腸桿菌屬，巴斯德菌科的嗜血桿菌屬，伯克氏菌科的纖發(fā)菌屬以及梭菌科的梭狀芽胞桿菌屬。各屬的分布情況為：有3種不同遺傳型細(xì)菌屬于檸檬酸桿菌屬，占64.39％；一種屬于腸桿菌屬，占12.12％；1種屬于嗜血桿菌屬，占6.06％； 1種屬于纖發(fā)菌屬，占3.79％； 1種屬于梭狀芽胞桿菌屬，占5.30％。
　　 腔液厭氧菌8種，分屬于兩個(gè)不同類群，即克雷伯氏菌屬和CFB菌群。其中有4種不同遺傳型細(xì)菌屬于克雷伯氏菌屬，占52.63

7、％；有4種不同遺傳型細(xì)菌屬于CFB菌群（Cytophaga-flexibacter-bacteroides group），占47.37％，兩類細(xì)菌含量差別不大。
　　 發(fā)酵腔超微結(jié)構(gòu)研究結(jié)果表明，暗黑鰓金龜幼蟲發(fā)酵腔由外向內(nèi)主要由3部分組成：肌肉層（包括橫肌和縱肌），上皮細(xì)胞層和發(fā)酵腔內(nèi)膜。不同發(fā)育階段發(fā)酵腔超微結(jié)構(gòu)，特別是由腸壁細(xì)菌形成的菌膜復(fù)合體存在明顯變化：1齡幼蟲發(fā)酵腔結(jié)構(gòu)缺少內(nèi)膜層，細(xì)菌數(shù)量很少，直接附著在上皮細(xì)胞細(xì)胞