蝴蝶蘭外源基因的導(dǎo)入及誘變研究.pdf

1、蝴蝶蘭愈傷組織的誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)中，花梗芽經(jīng)過1％的次氯酸鈉處理30min對(duì)外植體損傷較小且萌發(fā)率較高(85.0％)；6-BA濃度是莖芽增殖的關(guān)鍵因子，其濃度為10mg/L時(shí)，莖芽的數(shù)目和質(zhì)量均較為理想；莖芽頂端葉片誘導(dǎo)愈傷組織，正面放置的葉塊誘導(dǎo)愈傷組織的效果優(yōu)于反面放置的葉塊；椰子汁對(duì)葉塊誘導(dǎo)愈傷組織具有明顯的促進(jìn)作用。外源基因LTP導(dǎo)入蝴蝶蘭愈傷組織的實(shí)驗(yàn)中，用含AS的OD600值為0.4的新鮮農(nóng)桿菌對(duì)1-2mm的愈傷組織侵染20min，

2、共培養(yǎng)3d為本實(shí)驗(yàn)中較合適的處理組合，可獲得相對(duì)較高的轉(zhuǎn)化率(12.16％)；PCR分子鑒定的陽(yáng)性苗通過耐寒性實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行了抗寒性相關(guān)的生理指標(biāo)的測(cè)定。 通過研究電解質(zhì)外滲率，葉片丙二醛( MDA)含量，細(xì)胞保護(hù)酶SOD酶活性，葉片可溶性糖含量及脯氨酸含量五個(gè)生理指標(biāo)在溫度脅迫和恢復(fù)培養(yǎng)過程中的變化，表明LTP基因?qū)m植株的抗凍能力的提高有著重要作用，經(jīng)過低溫培養(yǎng)篩選最后獲得89棵轉(zhuǎn)基因抗性苗。在蝴蝶蘭愈傷組織的化學(xué)誘變實(shí)驗(yàn)中