油茶炭疽檢驗(yàn)檢測(cè)技術(shù)研究.pdf

1、油茶炭疽病是油茶樹的主要病害之一,在我國(guó)長(zhǎng)江流域以南各省的大面積油茶栽培區(qū),特別是在我國(guó)油茶中心分布區(qū)的湖南、江西和廣西等省發(fā)生普遍。油茶炭疽病害發(fā)生后,引起嚴(yán)重落果、落蕾、枝梢枯死,甚至整株衰亡,造成重大經(jīng)濟(jì)損失。本文系統(tǒng)分析了油茶炭疽病原菌膠孢炭疽菌的風(fēng)險(xiǎn)性并提出風(fēng)險(xiǎn)管理措施,研究了油茶炭疽病原菌形態(tài)學(xué)鑒定以及分子生物學(xué)快速檢測(cè)方法,初步制備出油茶炭疽病原菌快速檢測(cè)試劑盒。
　　 (1)油茶炭疽病原菌風(fēng)險(xiǎn)性分析
　　

2、 我國(guó)有害生物的危險(xiǎn)性綜合評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)分為4級(jí),其中R值3.0～2.5為特別危險(xiǎn),2.4～2.0為高度危險(xiǎn),1.9～1.5為中度危險(xiǎn),1.4～1.0為低度危險(xiǎn),通過(guò)有害生物風(fēng)險(xiǎn)性分析,油茶炭疽菌膠孢炭疽菌的R值是1.55,這個(gè)結(jié)果說(shuō)明其在我國(guó)南方屬于中度危險(xiǎn)的森林有害生物,我國(guó)正大力發(fā)展油茶產(chǎn)業(yè),應(yīng)將其列為油茶中心產(chǎn)區(qū)及周邊地區(qū)的檢疫對(duì)象。加強(qiáng)對(duì)油茶炭疽病菌的檢疫力度,對(duì)苗木調(diào)運(yùn)進(jìn)行嚴(yán)格的檢疫調(diào)運(yùn)要求,阻止該菌擴(kuò)散；同時(shí)加強(qiáng)檢疫宣傳,提高國(guó)

3、民檢疫意識(shí),使茶農(nóng)以及苗木商能自覺(jué)遵守檢疫規(guī)程。在氣候條件適宜該菌生存的地區(qū),組織人員對(duì)苗木生產(chǎn)進(jìn)行專門管理,管好源頭。
　　 (2)油茶炭疽病原菌形態(tài)學(xué)鑒定
　　 通過(guò)繁殖器官的類型以及分生孢子梗的著生方式確定油茶炭疽病原菌所屬黑盤孢目,油茶炭疽病菌的孢子為單細(xì)胞、無(wú)色,確定其為無(wú)色單孢族,根據(jù)剛毛著生位置,分生孢子形狀,可確定其為刺盤孢菌屬,根據(jù)孢子形態(tài),分生孢子盤大小,以及剛毛的著生位置,結(jié)合油茶炭疽病引起病害的癥

4、狀,最后確定油茶炭疽病菌為茶赤葉枯刺盤孢菌,即為膠孢炭疽菌。
　　 (3)油茶炭疽病原菌分子生物學(xué)快速檢測(cè)技術(shù)
　　 根據(jù)ITS序列差異設(shè)計(jì)了油茶炭疽菌的特異性引物,對(duì)不同地理來(lái)源的13個(gè)菌株進(jìn)行檢測(cè),均可擴(kuò)增出約330bp的條帶,對(duì)炭疽屬膠孢炭疽菌以外21種炭疽菌均擴(kuò)增不出條帶。利用特異性引物常規(guī)PCR擴(kuò)增可檢測(cè)含量為1pg/25μ L的病原菌,巢式PCR檢測(cè)靈敏度為10 ag/25μ L,檢測(cè)靈敏度至少提高了1000