常用內(nèi)參基因在小鼠乳腺、肝臟、小腸組織中表達(dá)穩(wěn)定性比較.pdf

1、本試驗(yàn)由三部分組成，主要研究了不同泌乳期小鼠乳腺組織、經(jīng)過不同免疫處理的小鼠肝臟組織以及幼齡小鼠成長過程中小腸組織內(nèi)參基因的穩(wěn)定性。應(yīng)用熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測基因B2M，ACTB，GAPDH，SDHA，HPRT1和ARBP的表達(dá)水平，并應(yīng)用geNorm程序進(jìn)行分析，最終選出合適的內(nèi)參基因，為研究目標(biāo)基因的表達(dá)奠定基礎(chǔ)。 試驗(yàn)一：實(shí)時(shí)定量PCR(qPCR)是檢測細(xì)胞和組織中mRNA表達(dá)量最常用的技術(shù)之一，而使用qPCR要求對數(shù)據(jù)進(jìn)

2、行標(biāo)準(zhǔn)化。在本試驗(yàn)中通過qPCR研究六個(gè)潛在內(nèi)參基因(B2M，ACTB，GAPDH，SDHA，HPRT1和ARBP)在不同泌乳期小鼠乳腺組織中的表達(dá)情況。經(jīng)過SAS6.12中ANOVA模型進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果表明B2M差異顯著(P<0.05)。經(jīng)過geNorm程序分析，所選內(nèi)參基因穩(wěn)定性從高到低排序分別是GAPDH/HPRT1，ARBP，ACTB，SDHA，B2M。由此推薦應(yīng)用基因GAPDH和HPRT1作為實(shí)時(shí)定量PCR不同泌乳期小鼠乳腺

3、組織的內(nèi)參照。 試驗(yàn)二：目前實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)已廣泛應(yīng)用于細(xì)胞或組織mRNA的轉(zhuǎn)錄水平的檢測和定量。選擇合適的內(nèi)參基因可以消除不同標(biāo)本在RNA的產(chǎn)量、質(zhì)量以及逆轉(zhuǎn)錄效率上可能存在的差別，從而獲得目標(biāo)基因特異性表達(dá)的真正差異。本試驗(yàn)應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)，研究小鼠在經(jīng)過免疫刺激后，B2M，ACTB，GAPDH，SDHA，HPRT1和ARBP共6個(gè)內(nèi)參基因在肝臟組織中的表達(dá)情況。結(jié)果表明，這6個(gè)內(nèi)參基因表達(dá)存在差異。經(jīng)過geNorm

4、程序統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，確定了ACTB，GAPDH兩個(gè)看家基因適用于校正目標(biāo)基因的表達(dá)量，為研究小鼠免疫刺激后肝臟目標(biāo)基因的表達(dá)奠定基礎(chǔ)。 試驗(yàn)三：內(nèi)參基因常用于實(shí)時(shí)定量PCR檢測mRNA表達(dá)水平的校正和標(biāo)準(zhǔn)化，但是內(nèi)參基因表達(dá)受生理階段、組織或細(xì)胞以及實(shí)驗(yàn)條件的影響。因此，本試驗(yàn)選擇B2M，ACTB，GAPDH，SDHA，HPRT1和ARBP共6個(gè)內(nèi)參基因，研究其在幼齡小鼠小腸組織內(nèi)的表達(dá)情況。經(jīng)過geNorm程序和NormFinde