篦子三尖杉的組織培養(yǎng)及生物堿檢測.pdf

1、篦子三尖杉(Cephalotaxus oliveri Mast.)是一種古老孑遺植物,它的葉、枝、種子、根可提取多種植物堿,對治療白血病和淋巴肉瘤等有一定的療效,同時(shí)又是材用和園林綠化用的優(yōu)良樹種。隨著篦子三尖杉的開發(fā)利用及其潛在價(jià)值的發(fā)現(xiàn),篦子三尖杉的快速繁殖越來越顯示出它的重要意義。但到目前為止,篦子三尖杉的組織培養(yǎng)在國內(nèi)外開展極少,更未在生產(chǎn)上推廣應(yīng)用。本研究運(yùn)用植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),分別對篦子三尖杉愈傷組織的誘導(dǎo),愈傷組織培養(yǎng)體系和

2、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)體系的建立及其高三尖杉酯堿代謝的調(diào)控等方面的研究。主要研究結(jié)果如下:
　　 (1)湖南地區(qū)三種三尖杉(普通三尖杉、篦子三尖杉、粗榧)葉片中高三尖杉酯堿的含量高低為:篦子三尖杉>粗榧>普通三尖杉。
　　 (2)篦子三尖杉愈傷組織較容易誘導(dǎo),各種培養(yǎng)基很大范圍內(nèi)都可以產(chǎn)生愈傷組織。其中最佳愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:MS+2.0 mg·L-1 NAA+0.5 mg·L-16-BA+1.0mg·L-12,4-D+0.5

3、mg·L-1 KT。篦子三尖杉外植體取材應(yīng)選擇在3～5月間的嫩葉葉基,其愈傷組織誘導(dǎo)率最高達(dá)100％,且外植體的污染率低。
　　 (3)在愈傷組織的繼代培養(yǎng)中,以愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為基礎(chǔ),研究了蔗糖濃度、愈傷組織接種量、培養(yǎng)基pH值和植物激素對三尖杉愈傷組織生長的影響。結(jié)果表明,以培養(yǎng)基 MS+2.0 mg·L-1 NAA+0.5 mg·L-16-BA+1.0mg·L-12,4-D+0.5 mg·L-1 KT,蔗糖30g·L-1

4、,接種量2.0g·40mL-1,pH值為5.8的條件下,愈傷組織增值效果最好。研究了愈傷組織培養(yǎng)中培養(yǎng)條件及天然有機(jī)營養(yǎng)物質(zhì)對高三尖杉酯堿代謝的影響。試驗(yàn)結(jié)果顯示:添加蛋白胨0.1g·L-1時(shí),愈傷組織鮮重增長率最高達(dá)到556.44％,但高三尖杉酯堿含量低,而水解酪蛋白為0.1g·L-1時(shí)不僅愈傷組織干重增長率提高到330.62％,而且高三尖杉酯堿的含量也提高到16.8μg·g-1。
　　 (4)在懸浮細(xì)胞培養(yǎng)中,蔗糖濃度低于3

5、0 g·L-1時(shí)有利于細(xì)胞生長；搖床轉(zhuǎn)速為80 r·min-1,pH為5.8的培養(yǎng)條件有利細(xì)胞生長；高的接種量(2.0g·30ml-1)有利于細(xì)胞生物量合成；以培養(yǎng)基 MS+2.0 mg·L-1 NAA+0.5 mg·L-16-BA+1.0mg·L-12,4-D+0.5 mg·L-1 KT,添加蔗糖30g·L-1,每30～35d繼代一次,成功地建立了篦子三尖杉懸浮細(xì)胞培養(yǎng)體系,細(xì)胞增長率達(dá)到852.93％。
　　 (5)研究了培

6、養(yǎng)條件、高三尖杉酯堿代謝前體對高三尖杉酯堿代謝的影響。結(jié)果表明培養(yǎng)基起始pH值為6.2時(shí),高三尖杉酯堿的代謝量最高；添加酪氨酸0.1mg·L-1+苯丙氨酸0.5 mg·L-1的代謝前體能顯著提高高三尖杉酯堿的代謝,高三尖杉酯堿的含量比對照提高了77％,為8.5μ g·g-1。
　　 (6)篦子三尖杉固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)愈傷組織中高三尖杉酯堿的檢測:對比了篦子三尖杉固體培養(yǎng)的愈傷組織和篦子三尖杉懸浮培養(yǎng)的愈傷組織中高三尖杉酯堿的含量