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文檔簡介
1、為了挖掘小麥近緣禾草簇毛麥(Dasypyrum villosum L.,2x)的優(yōu)質(zhì)谷蛋白基因資源,利用基因組PCR技術(shù),從簇毛麥基因組中克隆了2個(gè)高分子量麥谷蛋白亞基基因(Dv-1,Dv-2)和1個(gè)γ-醇溶蛋白基因(Dv-γ)。Dv-1和Dv-2分別為960和1158個(gè)核苷酸,序列分析表明,它們都屬于y型高分子量麥谷蛋白亞基基因。 Dv-2具有y型亞基的典型特征,而Dv-1的N-端保守區(qū)與典型的y型高分子量麥谷蛋白亞基相比少
2、了2個(gè)半胱氨酸殘基(只有3個(gè)半胱氨酸殘基),但是其重復(fù)區(qū)符合y型亞基的特點(diǎn)(即由六肽、九肽組成),聚類分析中也歸為y型高分子量麥谷蛋白亞基基因。Dv-γ含894個(gè)核苷酸,通過序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)它與已知的γ-醇溶蛋白有著高度的相似性,包含5個(gè)典型的結(jié)構(gòu)域,其中含有8個(gè)保守半胱氨酸殘基。進(jìn)化分析表明,本文克隆的Dv-1和Dv-2(V基因組)與來自纖毛披堿草StH基因組的HMW-GS基因具有較近的親緣關(guān)系;Dv-γ與亞家族I中的γ-醇溶蛋白基因親緣
3、關(guān)系較近。谷蛋白中半胱氨酸殘基的數(shù)目和位置與面粉的品質(zhì)相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)中 Dv-1由于半胱氨酸殘基數(shù)的缺失,可能影響到其在面粉大聚體形成中的作用。 小麥白粉?。≒owdery mildew)是世界范圍內(nèi)小麥生產(chǎn)的主要病害之一,嚴(yán)重影響其產(chǎn)量和品質(zhì)。由于小麥白粉病病原菌生理小種多、變異快,因此培育和推廣抗病品種是防治小麥白粉病最為經(jīng)濟(jì)、安全和有效的途徑。由于大麥mlo基因的隱性純合體(即mlo植物)對(duì)白粉病具有廣譜抗性。小麥mlo基因
4、cDNA與大麥有92%的同源性,克隆小麥mlo基因cDNA,通過農(nóng)桿菌侵染等方法使內(nèi)含子發(fā)夾結(jié)構(gòu)(ihpRNA)整合到植物基因組可實(shí)現(xiàn)持久RNAi,而利用RNA干擾技術(shù)減弱或抑制其內(nèi)源mlo基因的表達(dá),則有望提高小麥對(duì)白粉病的抗性。 本研究在小麥mlo基因cDNA片段(1434bp)的3’編碼區(qū)(即MLO蛋白的C端),選擇預(yù)計(jì)抑制效率較高的部分序列,構(gòu)建了植物RNAi表達(dá)載體pTCK-Cmlo,并轉(zhuǎn)化了對(duì)白粉病敏感的小麥優(yōu)良品種
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