口蹄疫滅活疫苗中VP1基因分析方法的建立及應(yīng)用.pdf

1、應(yīng)用口蹄疫滅活疫苗中加入酒精凍融離心破乳純化抗原技術(shù)，對(duì)口蹄疫白油乳化滅活疫苗病毒中的RNA進(jìn)行提取，并與提取的制苗病毒、二乙烯亞胺滅活病毒的RNA，就VP1基因進(jìn)行了逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增、核酸序列測(cè)定，利用DNAStar軟件包中的SepMan程序進(jìn)行序列拼接，將所得序列進(jìn)行同源性比較分析，結(jié)果顯示3種來(lái)源的VP1基因片段長(zhǎng)度均為639bp，與預(yù)期目標(biāo)相符，核苷酸序列顯示，3種方法處理的病毒VP1同源性為100％，說(shuō)明滅活劑BEI和

2、乳化工藝沒(méi)有全部破壞口蹄疫病毒VP1基因核酸。由此，建立了一種檢測(cè)、分析口蹄疫滅活疫苗毒株VP1基因的核酸序列的新方法。 通過(guò)以上建立的方法，對(duì)國(guó)內(nèi)三個(gè)不同廠家的口蹄疫滅活疫苗中的VP1基因與國(guó)內(nèi)外口蹄疫病毒參考序列進(jìn)行同源性、差異性比較分析，繪出遺傳發(fā)育樹(shù)圖譜。結(jié)果顯示，有2個(gè)廠家疫苗0型病毒株為泛亞拓?fù)湫停?個(gè)廠家為古典中國(guó)拓?fù)湫汀?個(gè)泛亞拓?fù)湫鸵呙缰曛g的同源性為96.2％，他們與國(guó)際上流行毒株O/LY/2000、O/MO