布魯氏菌強啟動子的篩選及重組口蹄疫病毒VP1基因的表達.pdf

1、布魯氏菌?。˙rucellosis，簡稱布?。┦怯刹剪斒暇鸬囊环N重要的人獸共患病，2012年我國國務院印發(fā)了《國家中長期動物疫病防治規(guī)劃（2011-2020年）》，將布病列為優(yōu)先防治的國內16種動物疫病之一，并作為當前防控工作的重中之重。該病對畜牧業(yè)和人類健康均構成嚴重威脅，使用疫苗免疫是防控布氏菌病的重要措施之一。
　　目前，我國用于控制布病的疫苗主要是S2株（豬型2號苗），其具有毒力較弱、免疫效果良好、安全性高等特點。布魯

2、氏菌能夠引起機體強烈的Th1型免疫應答，這使得布魯氏菌成為理想的異源性抗原載體，為了開發(fā)出能高效表達外源基因的布魯氏菌活載體疫苗，在本課題中我們首先使用綠色熒光蛋白作為報告基因，將布魯氏菌組成型啟動子Psod、Pdnaj和Pdnak分別克隆入YGT-pBBR1mcs2，得到重組表達載體YGT-pBBR1mcs2-Pdnaj、YGT-pBBR1mcs2-Psod和YGT-pBBR1mcs2-Pdnak并轉化至布魯氏菌。熒光顯微鏡檢測GFP

3、蛋白的表達情況。結果表明，3種不同強度的啟動子均能在布魯氏菌S2中啟動GFP基因的表達且啟動能力由強到弱依次為：Pdnak、Pdnaj、Psod。
　　口蹄疫（Foot and mouth disease，FMD）是由口蹄疫病毒（Foot and mouth disease virus，FMDV）引起的偶蹄動物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，該病可引起偶蹄類動物的口、足等部位皮膚出現水泡而造成部份動物死亡，嚴重影響畜牧產業(yè)的發(fā)

4、展。VP1蛋白是FMDV的主要結構蛋白，是病毒感染細胞的關鍵，具有與細胞受體結合的位點。口蹄疫VP1蛋白可作為研制口蹄疫基因工程疫苗的首選抗原。
　　本研究以豬種布魯氏菌S2株為親本株，利用蔗糖自殺質粒載體，將FMDV的VP1基因表達框部分替代了布魯氏菌wboA基因，成功構建了重組口蹄疫病毒VP1基因的布魯氏菌病活疫苗。使用熒光定量PCR的方法對重組菌的VP1基因的轉錄情況進行檢測，發(fā)現VP1基因在宿主菌內有顯著的轉錄變化，說明口