O型口蹄疫病毒VP1蛋白的原核表達及反應原性檢測.pdf

1、根據(jù)GenBank中已發(fā)表的FMDV毒林VP1的基因序列，設計并合成一對能擴增639bp基因片段引物，引物兩端分別加BamH I和Not I酶切位點。用PCR的方法擴增得到VP1基因，將其克隆到pMD18-T Vector進行序列測定。用分子生物學軟件對本試驗測定的FMDV VP1基因序列與GenBank已公布的O型FMDV VP1基因序列進行同源性比較，結果顯示擴憎到的VP1基因序列與GenBank已公布的O型FMDV VP1的基因序

2、列的同源性較高均在93％以上，其中與CHA株、LAO林、MOG株和RUS株同源性在98％以上。對重組克隆質粒PTVP1進行雙酶切得到639bp的目的片段，將其以正確閱讀框架定向插入pET-32a(+)中，然后轉化至E.colI BL21 DE3)，于30℃以1mmol/L的IPTG誘導，發(fā)現(xiàn)VP1基因得到了高效表達，且表達產(chǎn)物分子量約為48KD。 將高效表達的目的蛋白經(jīng)超聲波裂解，取沉淀和上清分別進行可溶性分析，發(fā)現(xiàn)表達蛋白以包