魚用中藥制劑“天然漁康”的研究開發(fā).pdf_第1頁
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文檔簡介

1、我國漁業(yè)自1990年起總產(chǎn)量連年位居世界首位,占全球水產(chǎn)品總產(chǎn)量的四分之一以上,呈現(xiàn)持續(xù)上升、穩(wěn)步發(fā)展的大好局面。但水產(chǎn)品質量安全令人擔憂,迫切需要解決病害防治、藥物殘留、禁用藥物禁而不止等問題。中草藥應用于魚類疫病防治,既能解決上述問題,又經(jīng)濟。為此,我們開展了魚用中藥制劑“天然漁康”的研究開發(fā)。
   1不同中藥組方的篩選
   用四個中藥組方對淡水魚常見致病菌進行抑菌效果對比試驗,初步篩選中藥組方。結果表明:由黃芩

2、、魚腥草、大黃、大蒜組成的Ⅰ號方,由黃芩、蒲公英、黃連、魚腥草等組成的Ⅱ號方,和以大黃、五倍子、側柏葉、大蒜等組成的Ⅳ-1、Ⅳ-2號組方具有較強的抗菌性;由板蘭根、魚腥草、地錦草、敗醬草等組成的Ⅲ號配方抗菌性最弱;以大黃、五倍子、側柏葉、大蒜等構成的Ⅳ-3、Ⅳ-4號組方抗菌活性最強。各組方對嗜水氣單胞菌、哈唯弧菌、豚鼠氣單胞菌、鰻弧菌、舒伯特氣單胞菌、腸型點狀產(chǎn)氣單胞菌、熒光假單胞菌等7種常見病原菌的MBC/MIC為:除Ⅱ號組方58-2

3、0-9的MBC/MICO為16外,其余各組方的MBC/MIC為2、4、8,均小于16,具有高度敏感性,說明這些組方對這7種病原菌具有較好的殺滅作用。
   2“天然漁康”的制備工藝研究
   為制備“天然漁康”,篩選了大黃中大黃總蒽醌和五倍子中沒食子酸提取的最佳工藝條件。一是根據(jù)大黃總蒽醌的理化特性,對大黃中提取大黃總蒽醌進行回流、滲漉、溫浸三種提取方法考察;選擇提取溶劑、溶劑濃度、提取次數(shù)、提取時間等因素進行正交優(yōu)化試

4、驗。二是根據(jù)五倍子中沒食子酸的理化物性,對五倍子中提取沒食子酸的酸種及其濃度進行考察。大黃中提取大黃素以回流方法最佳,總蒽醌的含量可達1.95%,高于溫浸法所得的1.24%、滲漉法所得的0.90%;確立了提取總蒽醌工藝:藥材粗粉加8倍量70%的乙醇回流2次,第一次5倍量乙醇2h,第二次3倍量乙醇1h,可獲得大黃素含量>0.321mg/mL、轉移率>80%。五倍子用酸水解提取沒食子酸,結果硫酸水解比鹽酸好,最佳提取工藝為用2.8mol/L

5、硫酸水解3h,其提取物中沒食子酸的含量可達63.91%。本工藝合理可行,有利于“天然漁康”的生產(chǎn)。
   3 TLC-HPLC法檢測“天然漁康”中的大黃素
   建立了一種快速靈敏的測定純中藥制劑“天然漁康”中的大黃有效成分的TLC-HPLC法。大黃200g、側柏葉509粉碎成粗粉,用70%乙醇適量加熱回流,冷卻至室溫,濾過,減壓濃縮至適量;以硅膠G為吸附劑,正己烷-醋酸乙酯-甲酸(30:10:0.5)為展開劑。色譜柱為

6、漢邦Lichrospher C18柱(4.6×150mm,5μm);流動相:甲醇-0.1%磷酸溶液(85:15);柱溫27℃;檢測波長245nm;流速為1.0mL/min。該方法的線性范圍為0.086~1.72μg,r=0.99995(n=5);平均回收率(n=5)為97.8%,RSD=1.8%。該方法簡便、準確,重復性好,可用于“天然漁康”的質量控制。
   4“天然漁康”的急性毒性試驗研究
   按照《新漁藥臨床檢驗

7、規(guī)范》中檢驗方法進行測定,在pH為6.8~7.5,水溫23~25℃條件下,設100、500、1000和3000 mg/kg·bw4個染毒劑量組和不加藥的空白對照組進行試驗,每組設3個重復,以24h、48h、96h內試驗魚致死的最低劑量和下一個劑量為最低致死劑量范圍,并計算出致死率。根據(jù)直線內插法求出24h、48h、96h的半致死量(LD50),“天然漁康”鯉魚的96hLD50>3000mg/kg魚重。建鯉在整個使用“天然漁寶”過程中其攝

8、食、體色、糞便、行為活動等均無異常改變,與對照組相比未見明顯不同。
   5“天然漁康”的長期毒性試驗研究
   參照《新漁藥臨床檢驗規(guī)范》要求,對純中藥制劑“天然漁康”應用于建鯉進行長期毒性試驗。在整個用藥過程中,建鯉攝食、體色、糞便、行為活動、主要器官解剖觀察等均無異常改變。建鯉體重在給藥期間均增長,與對照組相比,添加2%組的增重率顯著(P<0.05)提高了22.67%;添加0.5%、1%和4%組增重率分別提高了1.

9、27%,6.16%,16.68%。
   根據(jù)新漁藥研究開發(fā)要求,對“天然漁康”進行魚類主要病原菌抑菌試驗,結果表明,其對淡水魚類細菌性敗血癥病原菌BSK-10、豚鼠氣單胞菌ST78-3-3、鰻弧菌E-3-11、舒伯特氣單胞菌CR79-1-1、熒光假單胞菌56-12-10的MIC與MBC均為25μl/L;對腸型點狀產(chǎn)氣單胞菌58-20-9的MIC與MBC均為5000μl/L,可用于這些病原菌所致相應疾病的防治。
   7

10、“天然漁康”對細菌性敗血癥的防治試驗
   根據(jù)《漁藥臨床試驗技術規(guī)范》要求,對“天然漁康”淡水魚類細菌性敗血癥的防治試驗。結果:對鯉魚人工感染嗜水氣單胞菌保護率高劑量組(餌料添加量0.5%)為78.57%,中劑量組(餌料添加量0.1%)為85.72%,低劑量組(餌料添加量0.05%)為49.99%,藥物對照組藥物保護率為64.29%?!疤烊粷O康”為魚類細菌性敗血癥等疾病的防治提供了一個新途徑。
   8“天然漁康”的臨

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