TaMBDs在小麥葉片中的表達(dá)特性及原核表達(dá)載體的構(gòu)建和體系的優(yōu)化.pdf

1、為了探討MBD基因與小麥春化作用的關(guān)系，本文利用半定量RT-PCR系統(tǒng)分析了6個(gè)TaMBDs在4個(gè)小麥品種中不同春化處理下、不同發(fā)育時(shí)期的葉片中的表達(dá)特性；并構(gòu)建6個(gè)TaMBDs的原核表達(dá)載體，優(yōu)化了融合蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)條件，主要研究內(nèi)容如下： 1.選取2個(gè)春麥品種（遼春10號(hào)和豫麥18）和2個(gè)冬麥品種（京841和肥麥），春麥分別進(jìn)行10、20、30天的春化處理，冬麥分別進(jìn)行10、20、30、40、50和60天春化處理，取各品種、

2、各處理不同發(fā)育時(shí)期的葉片為材料，利用半定量RT-PCR方法系統(tǒng)分析了6個(gè)TaMBDs在4個(gè)小麥品種的不同處理?xiàng)l件、不同發(fā)育時(shí)期的葉片中的表達(dá)特性，結(jié)果表明：在兩個(gè)春麥品種中，TaMBD1在不同處理?xiàng)l件、不同發(fā)育時(shí)期的葉片中表達(dá)量基本一致，表明TaMBD1在春麥葉片中的表達(dá)不受低溫處理和發(fā)育時(shí)期的影響。TaMBD2、TaMBD3和TaMBD4在不同處理?xiàng)l件、不同發(fā)育時(shí)期表達(dá)量有差異，且均隨春化處理時(shí)間的延長而表現(xiàn)出高表達(dá)時(shí)期的提前；TaM

3、BD6的表達(dá)表現(xiàn)出不同的趨勢(shì)。在兩個(gè)冬麥品種中，TaMBD1在不春化處理（春化0天）時(shí)，在不同發(fā)育時(shí)期葉片中的表達(dá)量基本一致，但不同春化處理后，TaMBD1在不同發(fā)育時(shí)期小麥葉片中的表達(dá)量表現(xiàn)出差異，表明TaMBD1在冬麥葉片中的表達(dá)受低溫處理的影響；在春化處理0天、10天和20天條件下，TaMBD2在發(fā)育不同時(shí)期葉片中的表達(dá)量基本相當(dāng)；春化處理30天后，其在不同時(shí)期葉片中有明顯的表達(dá)差異：TaMBD3、TaMBD4、TaMBD5和Ta

4、MBD6在不同春化處理、不同發(fā)育時(shí)期表達(dá)量有差異，且均隨春化處理時(shí)間的延長后期葉片中的表達(dá)被抑制，表明TaMBDs可能參與了小麥春化發(fā)育調(diào)控，但具體的生物學(xué)功能有待于進(jìn)一步驗(yàn)證。 2.成功構(gòu)建了6個(gè)小麥編碼甲基結(jié)合蛋白基因的原核表達(dá)載體pGEX-TaMBDs，并在大腸桿菌BL21（DE3）工程菌株中優(yōu)化了融合蛋白GST-TaMBDs的誘導(dǎo)表達(dá)條件。結(jié)果表明，用0.3、0.5和1.0mmol·L-1的IPTG誘導(dǎo)后，融合蛋白GST