空腸彎曲菌peb1A基因原核表達載體的構建和表達.pdf

1、本文目的：克隆空腸彎曲菌peb1A基因，構建peb1A基因原核表達載體并進行表達。為空腸彎曲菌的基因工程疫苗研究的基礎驗打下基礎。方法：(1)原核表達載體的構建及鑒定：PCR擴增空腸彎曲菌peb1A基因，擴增產物和質粒pET-28a(+)用BamH Ⅰ和Xho Ⅰ雙酶切后，分別用膠回收試劑盒回收目的片段，將載體和目的插入片段按1：3的比例用T4連接酶進行連接，獲得pET-28a(+)-peb1A重組質粒。制備大腸桿菌JM109感受態(tài)細胞

2、，將pET-28a(+)-peb1A重組質粒轉化大腸桿菌JM109感受態(tài)細胞，將轉化的菌液涂布于含卡那霉素的LB瓊脂平板上培養(yǎng)過夜，然后從LB瓊脂平板上挑取陽性克隆接種于LB液體培養(yǎng)基中增殖。抽提質粒進行雙酶切鑒定和PCR初步鑒定，經初步鑒定后進行測序鑒定。（2)抽提重組質粒pET-28a(+)-peb1A后轉化表達宿主菌BL21(DE3)，用IPTG誘導表達，用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)初步觀察重組蛋白PEB1的表