人腦膠質原纖維酸性蛋白(GFAP)原核表達載體的構建及蛋白表達的鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、背景：膠質原纖維酸性蛋白(GFAP)在神經損傷的發(fā)生發(fā)展過程中具有重要作用。 目的：對GFAP進行基因克隆，構建原核表達質粒并加以鑒定。 設計、時間及地點：單一樣本研究，于2008-09/11上海市長征醫(yī)院神經外科實驗室完成。 材料：中間載體pGEM-T Easy質粒購于Promega公司，原核表達質粒pGEX-4T-2由上海市長征醫(yī)院神經外科實驗室保存。 方法：從人腦膠質瘤組織提取mRNA，采用RT-P

2、CR的方法擴增GFAP序列并表達，然后與載體pGEX-4T-2連接，轉化宿主菌BL21構建重組質粒，誘導表達后純化，Western-blot鑒定。 主要觀察指標：總RNA鑒定結果，PCR擴增產物分子質量的鑒定，重組表達載體的酶切鑒定，Western-blot鑒定。 結果：目的載體構建完成后，用雙酶切、DNA測序與Western-blot的方法證實原核表達載體構建成功。 結論：pGEX-4T-2-GFAP原核表達載

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