布魯氏菌外膜蛋白的原核表達(dá)和鑒定.pdf

1、布魯氏菌外膜蛋白位于細(xì)菌細(xì)胞膜的最外層，部分外膜蛋白具有免疫原性和抗原保護(hù)作用。本研究的目的是克隆并表達(dá)馬爾他布魯氏菌部分外膜蛋白，并檢測(cè)所表達(dá)外膜蛋白的免疫原性。通過分析布魯氏菌的膜相關(guān)蛋白，從中選出27個(gè)分泌蛋白和跨膜蛋白，利用PCR擴(kuò)增方法獲得目的基因、凝膠回收試劑盒回收純化目的片段，然后與酶切回收的表達(dá)載體pGEX-4T-2連接構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化BL21感受態(tài)細(xì)胞，并通過酶切分析、PCR擴(kuò)增和序列測(cè)定分析鑒定重組質(zhì)粒，結(jié)果表

2、明成功構(gòu)建25個(gè)重組表達(dá)載體，成功轉(zhuǎn)化并獲得22個(gè)轉(zhuǎn)化菌株，而且重組質(zhì)粒中攜帶的目的基因編碼框完全正確。將構(gòu)建好的融合表達(dá)載體在不同濃度的IPTG誘導(dǎo)下在大腸桿菌BL2l中進(jìn)行表達(dá)，通過不斷改變誘導(dǎo)時(shí)機(jī)和誘導(dǎo)溫度等條件，共成功誘導(dǎo)表達(dá)16個(gè)目的蛋白。用野外牛陽(yáng)性血清進(jìn)行Western-Blot免疫印跡分析，7個(gè)蛋白能夠表現(xiàn)出程度不同程度的陽(yáng)性反應(yīng)，表明該7個(gè)蛋白具有一定的反應(yīng)原性。該研究為進(jìn)一步篩選布魯氏菌病免疫診斷抗原以及蛋白功能研究