鯉春病毒血癥病毒外膜蛋白G和基質蛋白M的原核表達及多克隆抗體的制備.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、鯉春病毒血癥是一種急性、出血性傳染病,具有較高的致死率,已給多國的鯉魚養(yǎng)殖業(yè)帶來嚴重的經濟損失。其病原為鯉春病毒血癥病毒(Spring Viremia of CarpVirus,SVCV),隸屬于彈狀病毒科水泡性病毒屬。我們根據SVCV基因組序列(GenBank:NC002803),人工合成了該病毒的兩種主要結構蛋白的開放性閱讀框序列—G蛋白基因序列和M蛋白基因序列,克隆至pMD19-T載體,經酶切、測序驗證后,再將其克隆至原核表達載體

2、pET-32aq(+),轉化表達菌株BL21(DE3),經表達條件的優(yōu)化,在0.1mmol/IPTG,37℃條件下誘導5-6h,可實現G蛋白和M蛋白的高效表達,但二者均主要以包涵體的形式存在,分別以割膠回收、His親和純化的方法獲得純化的G蛋白和M蛋白。將純化的蛋白分別免疫新西蘭大白兔,制備了這兩種結構蛋白的兔抗多克隆血清；ELISA檢測顯示,G蛋白兔抗血清的效價高達1:2560000,而M蛋白的兔抗血清效價為1:64000。Weste

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