嗜水氣單胞菌外膜蛋白基因的克隆與原核表達(dá).pdf

1、嗜水氣單胞菌是引起長白山中國林蛙紅腿病的重要病原，也是引起魚類爆發(fā)性疾病的重要病原之一，給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失。近幾年來，由于林蛙高密度養(yǎng)殖、種苗退化及環(huán)境污染等原因，導(dǎo)致該病不斷發(fā)生，此病傳染快，死亡率極高，給林蛙養(yǎng)殖業(yè)造成極大的經(jīng)濟(jì)損失。
　　嗜水氣單胞菌的保護(hù)性抗原很多，如 S層蛋白，外膜蛋白，蛋白酶等。本研究針對(duì)延邊地區(qū)林蛙紅腿病病原菌嗜水氣單胞菌，根據(jù) GenBank上發(fā)表的嗜水氣單胞菌外膜蛋白基因的核苷酸序列

2、設(shè)計(jì)并合成1對(duì)特異性引物，采用PCR方法擴(kuò)增出與預(yù)期設(shè)計(jì)的740 bp大小相符的片段，將擴(kuò)增產(chǎn)物連接到pMD18-T載體上，進(jìn)行序列測定和分析。
　　結(jié)果表明，所克隆的目的基因的核苷酸長為740 bp，共編碼246個(gè)氨基酸。該基因片段與已發(fā)表的嗜水氣單胞菌外膜蛋白基因核苷酸序列同源性為98.78％，氨基酸同源性為98.78%。然后利用生物信息學(xué)和分子生物學(xué)軟件，對(duì)嗜水氣單胞菌外膜蛋白的結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測，結(jié)果表明其為外膜孔蛋白。經(jīng)Eco