評(píng)價(jià)嗜麥芽窄食單胞菌滅活全菌和外膜蛋白的免疫保護(hù)作用.pdf

1、嗜麥芽窄食單胞菌對(duì)臨床上常用的絕大多數(shù)抗菌藥物耐藥，如青霉素、頭孢菌素、氨基糖苷類抗生素等。該菌具有高度的天然耐藥性和獲得耐藥性，少數(shù)細(xì)菌還有NDM-1（ New Delhi metallo-β-lactamase-1）質(zhì)粒，其耐藥機(jī)制與外排泵、膜屏障及產(chǎn)生水解酶等有關(guān)[1]。隨著嗜麥芽窄食單胞菌高度耐藥菌株的出現(xiàn)，治療嗜麥芽窄食單胞菌的感染變得越來越困難。目前國內(nèi)外還沒有研發(fā)出有關(guān)嗜麥芽窄食單胞菌感染的疫苗或免疫抗體，也沒有發(fā)現(xiàn)確定的

2、可以防護(hù)該細(xì)菌的抗原。由于滅活和減毒全細(xì)胞強(qiáng)勁的刺激和保護(hù)性免疫反應(yīng)能力，他們已經(jīng)被用于開發(fā)許多疫苗[2-4]。非發(fā)酵革蘭陰性桿菌（Nonfermentative Gram-Negative Bacill， NFGNB）的外膜蛋白(outer membraneproteins,OMPs)在銅綠假單胞菌[5]和鮑曼不動(dòng)桿菌[6]等多種細(xì)菌中也已經(jīng)被證實(shí)具有免疫作用，可以作為防治細(xì)菌感染的重要免疫蛋白。本研究的目標(biāo)是將嗜麥芽窄食單胞菌 K2

3、79a完整的滅活全細(xì)胞和部分外膜蛋白作為抗原評(píng)估其在體內(nèi)和體外的免疫保護(hù)作用，進(jìn)而確定該滅活全細(xì)胞和外膜蛋白是否可以作為候選疫苗，成為一種有效的防治嗜麥芽窄食單胞菌感染的方法。
　　本研究第一部分利用0.05M福爾馬林溶液制備嗜麥芽窄食單胞菌滅活全細(xì)胞，經(jīng)過活性檢測后來免疫小鼠，免疫后小鼠抗體效價(jià)達(dá)到試驗(yàn)要求后，通過體外健康人血調(diào)理殺傷試驗(yàn)以及體內(nèi)攻毒試驗(yàn)評(píng)價(jià)滅活全細(xì)胞的免疫保護(hù)作用。
　　本研究第二部分使用純化的重組蛋白

4、ompW、Tolc-omp免疫小鼠，這兩種蛋白是本課題組在前期試驗(yàn)中用免疫蛋白質(zhì)組學(xué)方法篩選出并經(jīng)過初步評(píng)價(jià)的具有免疫原性的嗜麥芽窄食單胞菌外膜蛋白，在免疫后小鼠抗體效價(jià)達(dá)到試驗(yàn)要求后，通過體外健康人血調(diào)理殺傷試驗(yàn)以及體內(nèi)攻毒試驗(yàn)評(píng)價(jià)這兩種重組抗原的免疫保護(hù)作用。
　　綜上所述，本研究以嗜麥芽窄食單胞菌滅活全細(xì)胞和兩種重組的外膜蛋白o(hù)mpW、Tolc-omp分別作為抗原免疫小鼠，成功刺激小鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)后，從體外和體內(nèi)兩方面來評(píng)價(jià)