地衣芽孢桿菌CP-16與嗜麥芽窄食單胞菌10號菌降解角蛋白關鍵酶研究.pdf

1、羽毛主要為角蛋白，且富含二硫鍵，較其他類型蛋白質更為穩(wěn)定。動物消化道內蛋白酶并不能將其水解，限制了羽毛蛋白質在畜禽日糧中的應用。打開二硫鍵，破壞角蛋白空間結構，是提高其利用率的關鍵。本實驗以高二硫鍵還原能力角蛋白降解菌地衣芽孢桿菌（B.licheniformis）CP-16和嗜麥芽窄食單胞菌（S.maltophilia）10號菌為實驗材料，旨在獲得具有高二硫鍵還原酶活性的酶蛋白，并對其與角蛋白酶協(xié)同作用進行研究，探索生物酶解角蛋白的關鍵

2、酶。
　　B.licheniform is CP-16降解羽毛關鍵酶蛋白的分離純化。在本實驗室研究的基礎上，利用離子交換層析和分子篩層析分離純化出了新的羽毛降解關鍵蛋白酶-寡肽酶。研究發(fā)現(xiàn)，其可促進角蛋白酶水解酪蛋白的水解度，其主要在角蛋白水解后期發(fā)揮作用。
　　具二硫鍵還原能力酶蛋白基因的克隆表達。利用生物信息學技術，在Uniprot中搜集到了B.licheniformis和S.maltophilia中有關二硫鍵還原的五個

3、酶蛋白核酸序列。根據(jù)該序列設計引物，以B.licheniformis CP-16和S.maltophilia10號菌為實驗材料成功擴增出目的基因，并在大腸桿菌中成功表達純化，分別命名為B-P、S-G、S-T、S-P和S-A。
　　具二硫鍵還原能力重組酶酶學性質及與角蛋白酶水解角蛋白相互關系研究。研究發(fā)現(xiàn)，P-Trx（本實驗室保存）、B-P、S-G、S-T、S-P和S-A等具有二硫鍵還原活性的6種酶的最適pH分別為9.0、9.0、6

4、.0、6.0、8.0和8.0，最適酶促反應溫度分別為40℃、40℃、55℃、40℃、45℃和55℃。具二硫鍵還原活性的P-Trx、B-P、S-G、S-T和S-P均可促進P-Ker對羽毛角蛋白的水解，其中P-Trx的促進率最高，為47％。P-Trx、B-P和S-P二硫鍵還原酶活性均受胰蛋白酶和糜蛋白酶的影響，但對P-Trx的影響最小，而糜蛋白酶可使B-P100％失活。同樣重組酶P-Trx和S-P對胰蛋白酶和糜蛋白酶也有一定影響，但均不足1